表位肽ELISA实验中，再生板的空白本底测试的流程是什么？

下面是适配表位肽竞争 ELISA、可写进材料方法的标准化空白本底测试流程；它是再生完成之后、正式上样之前的放行质控，全程不加入一抗、游离肽、待测样本。

前置准备

板：完成再生、漂洗、中和后的再生包被板；同步设置对照孔：新包被肽空白孔、仅包被缓冲液空白孔（同批次板，同步走整套流程）。

试剂：封闭液、二抗稀释液、二抗、洗涤液、底物液、终止液，和正式 ELISA 使用完全相同批次与浓度。

排布：待测再生板空白孔做复孔；对照孔同样设置复孔。

操作流程

漂洗中和：再生结束后，用中性洗涤缓冲液（TBS / PBS‑T）充分漂洗，每孔加满，浸泡后弃去，重复 2～3 次，去除残留再生液、酸碱。

封闭：每孔加入封闭液，体积与正式实验一致；采用固定的封闭温度与时间（如 37 ℃，60 min），避免局部干涸。

洗板：弃封闭液，洗涤液洗板，按照正式实验的洗板次数、浸泡时间执行，拍干。

加二抗：加入稀释好的二抗，孵育条件和正式实验保持一致。

洗板：弃二抗，同样式洗板，充分拍干。

底物显色：加入底物，避光孵育固定时长。

终止与读板：加入终止液混匀，在设定波长读取 OD 值。

对照补充（按需布设）

无二抗对照：封闭洗板后只加稀释缓冲液，不加二抗，后续同样底物显色，用来排查试剂自发显色。

游离肽竞争对照（溯源用，不是必做）：封闭后加入高浓度游离目标肽，再加入二抗；如果信号下降，提示存在特异性免疫复合物残留。

测试后判定简要顺序

计算复孔均值、CV；

和基线对照（新板空白）比较；

同步读取同板上零抑制孔，确认最大结合信号没有异常衰减；

如果空白超标，尝试一轮温和再生，复测；复测仍不合格则弃用。

简短版（适合材料方法）

再生处理后的板经充分漂洗中和，按常规 ELISA 流程进行封闭、洗板，加入二抗孵育，再次洗板后加入底物显色、终止并测定吸光度；全程不加入一抗、游离肽或待测样品，以评估孔内残留免疫复合物、固相非特异吸附及试剂本底；同步设置新包被板空白与包被缓冲液空白作为基线对照。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司