表位肽ELISA实验中，如何保存酶标板？

酶标板的保存分未包被空板、已经包被好肽的板、封闭完成的板、孵育结束待显色的板这几种场景，表位肽板因为短肽只是疏水吸附，稳定性远弱于重组蛋白包被板，保存不当很容易发生肽脱落、背景升高、信号丢失。

未包被的空白酶标板，密封后放在干燥阴凉的室温或者二到八摄氏度保存，避免受潮、暴晒，不要冷冻。高结合力板要注意避免和有机溶剂、挥发性试剂放在一起，防止板表面改性，影响后续肽吸附，开封后尽快用完，剩余板用自封袋加干燥剂密封。

已经包被完肽、还没封闭的板，最常用的保存方式是包被结束后弃掉包被液，不洗板，直接密封，四摄氏度放置过夜本身就是常规包被流程。如果包好之后不能马上做后续实验，弃去包被液，不用洗涤，密封避光放四摄氏度，尽量在四十八小时内进入封闭步骤，放太久肽会慢慢从板上解离，疏水肽会更明显，不建议长期存放。不建议冷冻包被好的肽板，冻融很容易破坏疏水吸附，肽直接脱落。

封闭完成、洗好并拍干的板，是最适合短期保存的状态。封闭洗板之后，把孔内液体尽量排干，用封板膜封紧，装入密封袋，放四摄氏度，一般可以放一到三天。存放时间越长，后续背景越容易走高，疏水肽板衰减会更快。存放的时候不要让孔内完全干透，过度干燥会造成封闭蛋白和肽发生不可逆变性，后续非特异吸附大幅上升。如果要放更久，不推荐，尽量现包现做，肽库筛选优先当天包板当天完成实验。

经过一抗或者二抗孵育、洗涤完成的板，不建议长时间保存，立刻加底物显色。HRP 酶标二抗结合在板上之后，放置越久，背景越容易飘，酶活性也会缓慢下降，信号不稳定，尽量不要中途停下保存。

显色终止之后的板，终止液留在孔内，避光放置，需要在五分钟内完成读板，放置过久吸光度会持续下降，数据失真。

还有几个需要注意的点，所有保存的板都要密封严实，防止水分蒸发和交叉污染，同时避免冷凝水滴落到孔内，冷凝水会稀释孔内组分、冲掉吸附的肽。不同肽的稳定性差异很大，亲水肽更容易解离，疏水肽更容易出现储存后背景升高。如果预实验发现包被后放置一晚信号明显下降，就不要提前包板保存，改为当天包板。另外，保存过的板，正式实验时必须带上全套对照，用来监控储存带来的信号变化。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司