封闭过度和封闭不足分别会对实验结果产生哪些影响？

封闭不足首先会抬高整个板子的背景信号，阴性孔和空白孔的 OD 上升，基线整体上移。阴性样本容易测出偏高的数值，增加假阳性风险，阴阳信号之间的差值被压缩，区分度变差。标准曲线整体向上偏移，低浓度样本的结果稳定性变差，批内和批间变异会变大。很多弱阳样本会跟着背景一起偏高，容易误判成阳性，高浓度阳性样本的读数也会同步抬升，定量结果整体偏高。肉眼观察时阴性孔会有可见的浅色显色，板面看起来不干净。

封闭过度不会抬升背景，阴性孔 OD 通常偏低或者正常，板面显色干净，很容易让人误以为封闭效果很好。它主要选择性抑制低浓度抗原的结合，高浓度抗原分子数量充足，可以竞争置换固相上吸附过多的封闭蛋白，所以强阳性样本信号基本稳定。弱阳质控、标准曲线低点、接近检出限的样本信号会明显下降，严重时弱阳直接低于临界值，出现假阴性。标准曲线的低浓度段会向下弯曲，低水平加标样本的回收率偏低，高浓度加标回收却表现正常，低浓度区域的重复性变差，会漏掉真实的弱阳性样本，对临界值附近结果的判读干扰最大。

还要注意两者同时存在的情况，一般是封闭蛋白发生聚合。这时板面局部背景高低不均，斑驳杂乱，同时弱阳信号被压低，既存在局部非特异吸附带来的假阳风险，又有低浓度样本丢失信号造成假阴的问题，结果波动会更加难以排查。

另外再简单区分和其他干扰的差别，方便你对照。过洗、抗体失活是强弱阳性信号一起下降，和封闭过度只打击弱信号不一样；基质抑制只影响基质中的样本，更换封闭条件不会改善信号。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司