分离血浆的过程中如何避免样本污染？

血浆分离过程中的污染分两类，一类是微生物污染（细菌、真菌、支原体），会造成抗原降解、样本浑浊、ELISA 背景升高；另一类是样本交叉污染，高浓度样本混入低浓度样本，造成结果假性升高，下面按操作流程说明防控要点。

采血阶段，采血管一次性使用，不要重复利用。皮肤穿刺部位充分消毒，等待酒精完全挥发再采血，避免酒精混入血液。采血完成后，盖紧管盖再轻柔颠倒混匀，不要打开盖子混匀，防止空气中微生物落入。不同受试者样本不要同时开盖，防止气溶胶交叉污染。

离心前准备，操作台用 75% 乙醇擦拭，等待干燥；离心管架、移液枪枪架同样擦拭。移液枪定期校准，枪头必须使用无菌一次性枪头，严禁枪头重复使用。操作全程尽量佩戴一次性手套，手套碰到台面、管壁外侧后，不要再触碰管内液体，必要时及时更换手套。尽量佩戴口罩，减少说话带来的飞沫污染。

离心环节，离心桶和离心套管提前擦拭消毒。采血管盖子全程保持盖紧状态再放入离心机，不能开盖离心。离心结束，等待离心机完全停稳再开盖，不要强行制动，避免管内液体震荡溅出。取出采血管时，观察管壁有无渗漏，出现破裂漏液的样本单独处理，不要和其他样本放在同一管架，漏出液会造成交叉污染。

吸取血浆转移的环节是污染最高发位置。一次只处理一份样本，处理完一份再打开下一个样本管盖。枪头只接触目标样本，吸样时枪头不要触碰管口外壁。吸完一份样本，立刻丢弃枪头，再处理下一份。吸取上层血浆时，不要触碰白膜和血细胞沉淀，除了减少细胞碎片，也避免沉淀里的微生物被带入血浆。转移用的新离心管提前做好标记，开盖时间尽量缩短，吸取完成马上盖紧管盖。如果需要二次高速离心，新离心管同样一次性无菌管，分装过程操作逻辑一致。

分装和保存，分装小管提前标记好编号，避免标记笔接触管口。分装完成立即盖紧盖子，尽快置于冰上。长期冻存样本，管盖拧紧，防止 - 80℃反复冻存过程中渗漏污染相邻冻存管。尽量按单次实验体积分装，减少后续反复开盖。

环境管理，尽量在生物安全柜内操作，没有生物安全柜就在干净独立的实验台操作，远离细菌培养、细胞培养区域，不要在有培养基、菌液的附近分离血浆。操作前后清理台面，废弃枪头和废液及时丢入一次性垃圾袋，不要长时间堆放在操作台。

容易忽略的细节，不要对着采血管管口说话或者咳嗽。如果手套不小心接触到样本液体，立刻更换手套，不要继续操作其他样本。样本出现浑浊、异味，直接舍弃，不要继续分装检测。不同组别样本操作顺序可以先处理低浓度样本，再处理高浓度样本，降低高值样本残留带来的交叉污染风险。

论文描述参考。血浆分离操作在洁净操作台内进行，操作前后使用 75% 乙醇擦拭台面。所有离心管、移液枪枪头均为一次性无菌耗材。样本管全程加盖离心，一次处理单个样本，每份样本更换新枪头，避免样本交叉污染。操作过程佩戴一次性手套与口罩，减少微生物污染风险。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司