不同类型的ELISA试剂盒在样本处理上有哪些特殊要求？

不同类型的 ELISA 试剂盒对样本处理有不同的特殊要求，以下是一些常见样本类型的处理要点：

唾液样本

采集时间：空腹采集，避免进食后 30 分钟内取样，以防唾液淀粉酶含量升高干扰检测。

采集器具：使用无菌唾液采集管，避免口腔黏膜细胞混入。

处理方法：样本收集后立即于 - 70℃速冻 1 小时，冰上融化后 10000rpm 离心 10 分钟取上清。

保存条件：短期保存（<7 天）可置于 4℃，长期需分装后存于 - 80℃，保存期≤2 个月。

尿液样本

采集要求：用无菌管收集中段尿，避免微生物污染，样本体积需≥50μL。

处理方法：2000-3000rpm 离心 20 分钟，取上清检测，若沉淀复现需二次离心；高浓度尿素样本建议 1:5PBS 稀释后检测，以降低基质效应。

保存条件：可分装密封保存，4℃保存应小于 1 周，-20℃不应超过 1 个月，-80℃不应超过 2 个月。

粪便样本

采集要求：尽量采集干的粪便，重量应大于 50mg。

处理方法：与 PBS 按 1:9（w/v）混合，冰浴超声破碎后 5000×g 离心 10 分钟，建议添加 0.05M EDTA 缓冲液以抑制金属蛋白酶活性。

保存条件：分装后 - 80℃保存≤2 个月，避免反复冻融，冻融次数≤3 次。

脑脊液样本

采集要求：需专业腰椎穿刺获取，避免血液污染。

处理方法：采集后 30 分钟内完成离心处理，2000-3000rpm 离心 20 分钟，取透明上清液；高脂样本需超速离心（10000×g，15 分钟）去除脂蛋白干扰。

保存条件：可分装密封保存，4℃保存应小于 1 周，-20℃不应超过 1 个月，-80℃不应超过 2 个月。

胸腹水样本

采集要求：使用无菌管收集。

处理方法：收集后立即离心（2000-3000rpm，20 分钟），浑浊样本可添加 1% Triton X-100 裂解细胞，但需验证对靶标无影响。

保存条件：分装后 - 80℃保存≤3 个月，复溶时 37℃水浴缓慢解冻。

细胞裂解液样本

采集要求：贴壁细胞用预冷 PBS 清洗 3 次。

处理方法：加入 RIPA 裂解液（含 1% 蛋白酶抑制剂），裂解后 10000-14000×g 离心 5 分钟，避免使用含 SDS 裂解液，以防干扰包被抗体。

保存条件：可分装密封保存，4℃保存应小于 1 周，-20℃不应超过 1 个月，-80℃不应超过 2 个月。

精液 / 阴道分泌物样本

采集要求：精液样本需 37℃孵育 30 分钟液化，阴道分泌物需用无菌管收集。

处理方法：精液液化后 4000rpm 离心 10 分钟取精浆，阴道分泌物需 2000-3000rpm 离心 20 分钟去除上皮细胞；高黏稠样本建议 1:3 PBS 稀释，同时需验证基质效应，比较稀释样本与标准曲线斜率偏差，偏差 > 15% 需重新处理。

保存条件：可分装密封保存，4℃保存应小于 1 周，-20℃不应超过 1 个月，-80℃不应超过 2 个月。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司