除了洗涤不，还有哪些因素会影响ELISA检测结果？

除了洗涤不，还有多种因素会影响 ELISA 检测结果，具体如下：

样本因素

样本采集与处理不当：如血液标本严重溶血，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，可催化底物显色造成假阳性。血液未完全凝固就强行离心分离血清，残留的纤维蛋白原可能形成纤维蛋白块，造成假阳性。此外，采血试管洗涤不、反复使用易交叉污染；肝素抗凝血浆可能因高浓度肝素吸附酶标记物不易洗脱而增加 OD 值，EDTA、酶抑制剂（如 NaN3）可抑制辣根过氧化物酶活性，影响检测结果。

样本保存问题：血液标本保存过久易滋生细菌，影响检测结果。时间过长的标本，血清标本 IgG 聚集成多聚体，AFP 形成二聚体，可能造成假阳性。

样本被污染：标本采集后及分离血清时若被细菌污染，可引起内源性辣根过氧化物酶增多，相应的酶标记方法会产生非特异性干扰，造成假阳性。

试剂因素

试剂过期或保存不当：过期试剂的活性可能下降或丧失，保存不当如未按要求冷藏、冷冻等，也会影响试剂的性能，导致检测结果不准确。

不同批次试剂差异：不同批次的试剂可能在成分、浓度等方面存在差异，如果未进行适当的质量控制，可能会导致结果波动。

试剂污染：如检测底物反复使用被污染，或者底物受到阳光照射时间过长，都可能出现假阳性结果。

仪器因素

加样器不准确：加样吸嘴的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测结果。吸嘴清洗困难，易造成交叉污染，影响加样量的准确性。

酶标仪问题：酶标仪进行比色时，反应板有气泡或者污染，容易出现吸光度值升高，从而造成假阳性结果。

洗板机故障：血清中残留的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机针小孔阻塞，造成未结合标记酶洗脱不，导致 “花板”，出现假阳性或假阴性结果。

操作因素

加样操作不当：加样时若出现滴加不准确、加样量过多或过少、加样速度过快或过慢等情况，都会影响抗原抗体的结合量，从而影响检测结果。

孵育温度和时间不准确：试验温度过高或过低都有可能引起血清蛋白异常，造成假阳性或假阴性。孵育时间过长或过短，也会导致抗原抗体结合不充分或过度结合，影响检测结果的准确性。

封闭不充分：如果封闭缓冲液无效，或者封闭时间过短、温度不合适等，导致孔板未完全封闭，会使非特异性结合增加，背景值升高，影响检测结果。

其他因素

实验环境：实验环境中的灰尘、杂质等可能污染反应板和试剂，影响检测结果。此外，环境温度、湿度的剧烈变化也可能对实验结果产生影响。

对照设置不当：ELISA 实验需要设置对照组，如阳性对照、阴性对照等，如果对照组设置不合理，如阳性对照浓度不准确、阴性对照被污染等，就无法准确判断检测结果的可靠性。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司