牛轮状病毒抗体（RVAb）酶联免疫分析ELISA试剂盒操作步骤

牛轮状病毒抗体（RVAb）酶联免疫分析elisa试剂盒操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30（192T 的 100 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A 50µl，再加入显色剂 B 50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
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