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邻甲苯胺法测定血糖的含量
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上传时间：2014/9/2 10:30:20
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上 传 者：郑州唯尔生物科技有限公司
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原理
葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的薛夫氏碱，通过比色可以定量测定。
试剂
1、邻甲苯胺试剂：称取硫脲1.5g溶于750ml冰醋酸中，加邻甲苯胺150ml及饱和硼酸40ml，混匀后加冰醋酸至1000ml，置棕色瓶中，冰箱保存。
2、葡萄糖标准溶液：5mg/mL，临用时稀释成1mg/mL。
操作方法
1、制作标准曲线：取6支试管编号后，按（将来试剂-葡萄糖标准曲线的制备）顺序加入试剂。加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4分钟取下，冷却，放置30分钟，用1cm比色杯，试剂空白为参比，测定630nm处吸光值，绘制标准曲线。
| 葡萄糖标准曲线的制备 | ||||||
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 标准葡萄糖液（ml） | 0 | 0.02 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
| 蒸馏水（ml） | 0.1 | 0.08 | 0.06 | 0.04 | 0.02 | 0 |
| 邻甲苯胺试剂（ml） | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| A630 |
|
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2、样品测定：取3支试管编号后，按（将来试剂-血清中葡萄糖含量的测定）分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定。加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4分钟取下，冷却，放置30分钟，用1cm比色杯，试剂空白为参比，测定630nm处吸光值，从标准曲线中可查出样品中血糖的含量。
| 血清中葡萄糖含量的测定 | |||
| 编号 | 对照 | 对照1 | 对照2 |
| 稀释的未知血清样品（ml） | 0 | 0.1 | 0.1 |
| 蒸馏水（ml） | 0.1 | 0 | 0 |
| 邻甲苯胺试剂（ml） | 5 | 5 | 5 |
| A630 |
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注意事项
邻苯甲胺法测定血糖具有操作简单，特异性较高的优点，试剂成本也较低，但该法一般在浓酸高温条件下进行反应，且组成单一试剂的某些有机化合物具有一定的毒性，对健康不利，又易损仪器，这是该法的缺点，因此在用该法做血糖测定时须注意安全。
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