蛋白含量的测定——考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒

蛋白质分子具有-NH3+基团，当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白标准液或样品中时，考马斯亮蓝染料上的阴离子和蛋白-NH3+结合，使溶液变为蓝色，通过测定吸光度可计算出蛋白含量。

试剂的配制

1、考马斯亮蓝贮备液 60×1瓶。临用时按照所需量用蒸馏水1:4稀释（即5倍稀释），配成应用液，4℃贮存。

2、蛋白标准液 0.615g/L蛋白标准液1ml×1支，4℃贮存。

3、配制2%组织匀浆。

操作

1、样本前处理 ①配制2%组织匀浆称取待测组织的重量，按重量体积比加生理盐水制备成10%的组织匀浆，1000-3000r/min，离心10min（根据所测指示不一样，则所需转速不一样），然后取组织匀浆上清再用生理盐水按1:9稀释成1%组织匀浆，或用生理盐水按1:4稀释成2%的组织匀浆待测。②血清可用生理盐水按血清：生理盐水1:49稀释，待测。

总的来说，测定范围为1g/L（mg/ml）左右为宜，请在批量测试前先做1~2个样本的预试。

2、按表操作

混匀后静置10min，于595nm波长处比色（1cm光径比色杯），用空白管调零，测定各管的吸光度。

3、蛋白含量的计算

蛋白含量（g/L）=（测定管吸光度-空白管吸光度）/（标准管吸光度-空白管吸光度）×标准管浓度（g/L）

原创作者：郑州唯尔生物科技有限公司