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elisa试剂盒实验-如何选择包被条件？
点击次数：370 发布时间：2015/6/18 8:45:53
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梁**
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elisa试剂盒实验-如何选择包被条件？
包被浓度的选择
包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的最适包被浓度需要通过实验来确定。
包板后需要封闭吗？应该选择什么样的封闭体系？
封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的实验条件.elisa试剂盒一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤彻底,不经封闭也可得到满意的结果.而在间接法测定中,封闭一般是必不可少的.常用的封闭剂有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明胶、5%的脱脂奶粉,AbMART推荐使用5%脱脂奶粉,价廉而且封闭能力强,不过5%脱脂奶粉只适合短期内使用,不宜长期保存,所以试剂盒中较少使用。
包被抗原的选择
包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类.天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被（先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固相化）.经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,elisa试剂盒一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上。
包被液的选择
一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲。
包被温度的选择
通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持。
原创作者：杰辉生物（北京）科技发展有限公司
