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牛残留检测ELISA试剂盒的标准曲线
点击次数：287 发布时间：2015/5/18 15:43:05
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牛残留检测elisa试剂盒的标准曲线
氨基糖苷类抗生素是一类应用广泛的广谱抗菌物,主要包括链霉素（SM）、庆大霉素（GM）、卡那霉素（KM）等,对奶牛乳房炎、子宫内膜炎等有很好的疗效,常用作兽医临床治疗及饲料药物添加剂。然而不规范用药会引起畜禽产品尤其是泌乳动物乳汁中的药物残留,对人类的健康构成潜在危害。
国内外已经建立了多种检测牛奶中链霉素残留的理化检测方法,虽然有些方法比较灵敏、精确,但由于方法复杂、耗时长、花费大、技术要求高等原因而不适合大批量样品的筛选。作为一种灵敏、快速、特异性强的方法,酶联免疫吸附测定法正逐渐应用于药物的残留检测。 为探索一种能够快速有效的检测牛奶中链霉素残留的方法,本研究采用单克隆抗体技术和酶联免疫吸附测定等技术,合成人工抗原,制备出抗链霉素单克隆抗体,建立了检测牛残留的ELISA测定法,组建成链霉素快速检测试剂盒并进行了优化和实际应用。
分别采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了链霉素的5种人工抗原,从免疫原性及稳定性等方面对5种抗原进行比较,最终选择活化酯法合成的BSA-SM/b作为免疫抗原,通过杂交瘤技术获得1株能稳定分泌抗链霉素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株5C10。制备的腹水效价为1: 1280000,蛋白浓度为26.2mg/ml,与其他抗菌药物的交叉反应率均低于0.1%。 利用5C10杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了检测SM残留的间接竞争ELISA方法。采用包被抗原稀释度1:3200,腹水抗体的工作浓度1:1.6×10~5,标准曲线线性方程为y=1.0522-0.3276x（10～1000ng/ml）,半数抑制浓度为93.22ng/ml,检测限约为5ng/ml。标准曲线的批内变异系数为11.87%,平均批间变异系数为8.017%。 初步组装试剂盒并对试剂盒的各组分的稳定性进行了检测和优化,成功建立了能在6个月内维持稳定的试剂盒。
原创作者：杰辉生物（北京）科技发展有限公司
