操作羊（elisa）组织蛋白酶B（cath-B）酶联免疫分析试剂盒

羊（elisa）组织蛋白酶B（cath-B）酶联免疫分析试剂盒
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

羊（elisa）组织蛋白酶B（cath-B）酶联免疫分析试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
1.2pg/ml - 40 pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定羊血清、血浆及相关液体样本中组织蛋白酶 B（cath-B）含量
羊（elisa）组织蛋白酶B（cath-B）酶联免疫分析试剂盒

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液18pg/ml
4 号标准品150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液9pg/ml
3 号标准品150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液4.5pg/ml
2 号标准品150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液2.25pg/ml
1 号标准品150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
羊（elisa）组织蛋白酶B（cath-B）酶联免疫分析试剂盒

操作程序总结：
计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释数，即为样品的实际浓度。

原创作者：北京雅安达生物技术有限公司