血液氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒说明书

保存强化液（Reagent B）和发光液（Reagent C）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

抗凝管：用于血液采集的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于去除样品杂质

测试管或黑色96孔板：用于发光检测用的容器

化学发光仪：用于检测化学发光

实验步骤

一、 样品预处理

选择一：血浆样品

1． 准备好抗凝管

2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里

3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）

4． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）

5． （选择步骤）放进－70℃冰箱里保存

6． 放进37℃培养箱里备用（1小时内）

选择二：血清样品

1． 准备好不含抗凝剂的储存管

2． 抽取1毫升血液，置于储存管里

3． 室温下，静置30分钟，直至血液凝结

4． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）

5． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）

6． （选择步骤）放进－70℃冰箱里保存

7． 放进37℃培养箱里备用（1小时内）

二、 测读

测读开始前，打开化学发光仪，设定仪器内温度为37℃预热和整合测读10秒或 15分钟；然后关掉实验室的灯光。将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。

1． 准备好测试管，做好标记：阴性对照、样品本底和样品活性

2． 移取xx微升清理液（Reagent A）到阴性对照测试管

3． 移取400微升上述预处理的待测血液到样品本底测试管

4． 移取400微升上述预处理的待测血液到样品活性测试管

5． 分别加入xx微升强化液（Reagent B）到上述测试管，除样品本底测试管外

6． 分别加入xx微升发光液（Reagent C）到上述测试管，除样品本底测试管外

7． 轻轻涡旋混匀

8． 即刻放进37℃化学发光仪里测读

9． 整合测读10秒，获得相对发光单位（relative light unit；RLU）

10． 或者整合测读15分钟，获得光电子读数：X 106 CPM（counted photon per minute）（注意：可以使用液体闪烁仪替代）

11． 计算ROS水平：

注意事项

1． 本产品为50次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 测试前，血液须新鲜收集，1小时内为

4． 样品制备后即刻测读，不宜过夜保存

5． 必要时，例如活性氧族过低，可以浓缩样品处理

6． 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化

7． 系统操作过程中，阴性对照只需测定一次

8． 测读的所有步骤均须在暗室里进行

9． 如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射（injector）管道

10． 本公司提供系列活性氧分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

原创作者：上海哈灵生物科技有限公司