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几种常用试剂的配制

点击次数:1520 发布时间:2012/11/29 9:46:49

  1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBS

NaH2PO4.2H2O

0.39 g

Na2HPO4 

1.27 g

NaCl 

0.85 g

NaN3

200 mg

H2O (蒸馏水)

至

1000 ml

          

  2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液pH7.4,PBST

NaCl 

2.0 g

KH2 PO4

0.2 g

Na2HPO4·12H2O

2.9 g

KCl

0.2 g

NaN3

0.2 g

H2O

至

1000 ml

吐温(Tween)20

0.5 ml

4℃ 保存备用

3、包被液(简称CB)pH9.6

Na2CO3 

1.59 g

NaHCO3 

2.93 g

NaN3

0.2 g

H20

至

1000 ml

密封盖好,4℃存放备用

                             

4、ELISA底物液(可溶性底物)

磷酸-柠檬酸缓冲液pH 5.0

0.1mol/L柠檬酸(21.014g/1000ml)

24.3 ml

0.2mol/L Na2 HPO4(28.4 g/1000ml)

25.7 ml

H2O

50 ml

4℃存放备用

5、DAB底物液(不溶性底物,组化病理等)

0.05mol/L

pH7.6  Tris-HCl

Tris

6.05 g

HCl(36%)

3.15 g(约2.7ml浓HCl)

HCl

至

1000 ml

DAB为3`,3`二氨基联苯胺,不溶性底物,呈棕红色


6、DAB溶液配制:(组化及Western blot 显色)

 称DAB30mg,用0.05mol/L  pH7.6Trs-HCl缓冲液100ml溶解,如有沉淀,过滤后使用,一般新鲜配制使用。

 用前加入1%H2O2 1~1.5ml,H202浓度为0.01%,混匀后使用。

7、3‘,3‘,5‘,5’,—四甲基联苯胺(TMB)溶液配制:

 用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或无水乙醇,将TMB配成1%浓度,4 ℃ 保存半年以内使用。

 使用前,用pH5.0磷酸—柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mgTMB)1%TMB液,再按每毫升TMB加入30% H2O2  1μl混匀后立即使用。2N  H2SO4终止后,450nm测定OD值。

8、1%离子琼脂胶配制液

 免疫双相扩散,单相扩散及免疫电泳中使用。

0.05U pH8.6巴比妥钠-HCl缓冲液

巴比妥钠

23.8 g

1mol/L   HCl

34.5 ml

H2O

2150ml

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