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【感受态细胞的制备】 用CaCl2处理制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞
点击次数：858 发布时间：2013/5/15 20:21:17
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周**
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2. 在无菌条件下将细菌转移到一个，用冰预冷的50 ml 聚丙烯离心管中，冰上放置10~20 min。
3. 于4℃4000转 /分离心10 min，回收细菌细胞。
4. 将管倒置1 min，以使最后残留的痕量培养液流尽。
7. 用无菌吸头从感受态细胞悬液中取200 μl 转移到无菌的微量离心管中，加DNA或连接反应混合物（体积≤10 μl，DNA≤50 ng），轻旋以混匀内容物，冰浴30 min。
8. 将离心管放到预加温到42℃的水浴中，90 s。
9. 将混合物快速转移到冰浴中，冷却1~2分钟，加入适当的培养基在37 ℃培养45 分钟，使细胞复苏，并表达质粒所携带的转化基因。
10. 将适当体积（每个90 mm平板可达200 μl）已转化的感受态细胞转移到相应抗生素的平板培养基上。
11. 将平板置于室温至液体被吸收 ，倒置平板于37℃培养箱中，12~16 h，平板培养，克隆在此期间应该出现，否则转化不成功。
原创作者：上海北诺生物科技有限公司
