联系我们

联系人：陈军

点击查看联系方式

资料下载

人骨形成蛋白-7(BMP- 7)elisa试剂盒酶联免疫分析

详细内容下载：

文件大小：17kb

上传时间：2012/9/25 9:40:35

文件类型：doc

上传者：上海信裕生物科技有限公司

查看次数：192次

下载次数：106次

       人骨形成蛋白-7（BMP- 7）elisa试剂盒酶联免疫分析
                  酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：                                                                                                                    96T
50ng/L  – 1600ng/L

使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中骨形成蛋白-7（BMP -7）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人骨形成蛋白-7（BMP -7）水平。用纯化的人骨形
成蛋白-7（BMP -7）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入骨形成蛋
白-7（BMP -7），再与HRP 标记的骨形成蛋白-7（BMP -7）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复
合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的
作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨形成蛋白-7（BMP -7）呈正相关。用酶标
仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人骨形成蛋白-7（BMP -7）
浓度。
试剂盒组成
1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1 瓶  8  标准品（3200ng/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12孔×8 条  9  标准品稀释液  1.5 ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1 瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 张
6  显色剂 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤
1.   标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
1600ng/L  5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
800ng/L  4 号标准品  150µl 的5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
400ng/L  3 号标准品  150µl 的4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
200ng/L  2 号标准品  150µl 的3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
100ng/L   1 号标准品  150µl 的2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2.   加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 10 µl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.   温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.   配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.   洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.   温育：操作同 3。
8.   洗涤：操作同 5。
9.   显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.  终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.  测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。  测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：

计算
    以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔第一孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月