抗血清的制备过程（二）

抗血清的制备过程（二）
抗血清（antiserum）是一种含有多克隆抗体的血清。通过注射抗血清可以传递被动免疫（passive immunity）治疗许多疾病。目前唯一能够治疗埃博拉病毒患者的方法就是通过注射前一个患者的抗血清到体内.
3、免疫途径，剂量和免疫周期

　　抗原注射途径可根据不同抗原及试验要求，选用皮内、皮下、肌肉、静脉或淋巴结内等不同途径注入抗原进行免疫。一般常采用背部、足掌·耳后等处皮内或皮下多点注射。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2～4周。常规免疫方案为抗原加CFA皮下多点注射进行基础免疫；再以免疫原加IFA作2～5次加强免疫，每次间隔2～3周，皮下或腹腔注射加强免疫。

　　1）常规（皮内多点注射）免疫：

　　1第一次免疫：剂量为每只兔子注射1.0 ml抗原乳剂（含抗原量1～2mg）。注射部位为两只后脚掌的皮内各注射0.2 ml，其余0.6 ml分多点注入脊柱二侧，颈部，腹股沟和腋窝等处淋巴结附近部位皮内，每点可注入0.05ml，分12点注入。

　　2第二次免疫：初次免疫后20天左右，剂量为1.0ml/只（1～2 mg/ml），加福氏不完全佐剂。注射部位在腹部皮下多点注射，每点注入0.1 ml。

　　3第三次免疫：再次免疫后两周内进行，注射剂量和部位同第二次免疫，免疫后7～14d抽取少许静脉血，分离血清，试血测定效价。

　　2）淋巴结免疫：主要优点是可减少用量。过程如下：

　　1卡价苗致敏：免疫前足掌皮下每侧各注入活卡价苗（75 mg/ml）0.3 ml。10天左右观察两侧腘窝淋巴结，一般可肿胀如蚕豆大小，此时即可进行淋巴结内免疫注射。

　　2第一次免疫：用手指定淋巴结后在两侧腘窝淋巴结内各注入抗原乳剂0.25ml，每只兔总量0.5 ml；为加强免疫，于初次免疫20天后，于腹部皮下多点注射不加佐剂抗原溶液1mg/1ml。

　　3二周后可如同第一次免疫的剂量和途径再注射一次，一般可在第三次免疫注射前试血滴定效价，效价如已达到要求可不必进行第三次免疫。

　　有条件的情况下，免疫后要加强动物饲料管理，如给熟黄豆饲养等。

　　3）腹腔免疫：一般不必加佐剂，适用于细胞性或颗粒性抗原，而且抗原性较强者，例如用绵羊红细胞免疫家兔或小鼠即可用此法。

4、试血，测定抗体效价

　　一般在第三次免疫后7～10天即可于兔耳静脉或小鼠尾尖取少量血，分离出血清之后进行试血。

　　① 环状试验，较为经典的方法，目前较少采用，如与20μg/ml以下的抗原于30 min内能出现“艹”的沉淀环，即测定抗体效价达1：5000以上时为合格。

　　② 免疫双扩散法，这是最常用的试血方法，其具体方法是，中间孔加稀释的抗原（1mg/ml）10μl，周围孔顺时针方向加制备的抗血清分别为1:2, 1:4, 1:8，1:16，1:32和1:64，（用生理盐水或PBS稀释）。经37℃保温24h后观察结果，效价在1:16以上即可决定放血。

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