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测效靶细胞杀伤—用流式细胞术法
点击次数：498 发布时间：2012/6/20 16:53:21
本实验技术来源于SciMall科学在线
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，国外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。具体参照如下：
1 计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM,37度30分钟。
2 拿出后，1000rpm,5min,可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次
3 与效应细胞混培，作用4-6小时。
4 将细胞混合液消化取出，洗二次，PI工作液5ul，避光30分钟后上流式
5 CFSE，PI双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞，除以靶细胞总数，即为杀伤率。
注意事项：
1、CFSE及PI的浓度必须注意，宁低勿高，个人感觉，如果标高的话，在4度放一晚好像会好一些
2、必须设全阴，CFSE单标，PI单标，CFSE＋PI双标并同步化的靶细胞的参照.
3、作用时间不能太长，不要超过8个小时。
1 计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM,37度30分钟。
2 拿出后，1000rpm,5min,可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次
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