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ELISA竞争抑制法普遍存在的操作问题
点击次数：491 发布时间：2012/3/20 10:59:41
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黄**
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两对半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测，而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。
而竞争抑制法的原理：酶标抗体与样本抗体在同样的体系中，与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲，应该先将样本与酶标抗体先行混匀，然后加入反应也进行。但实际工作中并非如此，都是分开加入反应孔。这样会造成先加入的先结合，与后加入者并不是公平的关系，因而也不符合等比原则。特别是在放置时间长，且温度高的情况下，对结果有很大的影响。
第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究。将阴性标本94份并用生理盐水进行1：30稀释，在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体，然后检测结果如下：
| 放置时间（min） | 阴性标本数 | 临界值－标本A450nm值 | 假阳性率（%） | ||
| <0.3 | 0.3~0.7 | >0.7 | |||
| 0 | 75 | 10 | 3 | 6 | 0 |
| 2 | 68 | 13 | 7 | 6 | 7.4 |
| 5 | 65 | 15 | 8 | 6 | 10.6 |
| 10 | 56 | 16 | 12 | 10 | 20.2 |
| 20 | 38 | 18 | 17 | 21 | 39.3 |
| 30 | 21 | 12 | 18 | 43 | 57.4 |
从上表可以看出，如果同时加入标本与酶标抗体，没出现假阳性现象。2分钟后再加入酶标抗体，由于标本比酶标抗体先结合了两分钟，因此出现了7.4%的假阳性。30分钟后再加，假阳性高达57.4%。因此建议竞争抑制法的项目，加十个样本后立即加酶标抗体，这样对检测结果没有影响。
原创作者：上海继锦化学科技有限公司
