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96T人类白细胞抗原C(HLA-C)酶联免疫分析说明书
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上 传 者：上海抚生实业有限公司
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人类白细胞抗原C（HLA-C）酶联免疫分析说明书
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人类白细胞抗原C（HLA-C）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人类白细胞抗原C（HLA-C）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人类白细胞抗原C（HLA-C）水平。用纯化的人类白细胞抗原C（HLA-C）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人类白细胞抗原C（HLA-C），再与HRP标记的HLA-C抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人类白细胞抗原C（HLA-C）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人类白细胞抗原C（HLA-C）浓度。
人类白细胞抗原C（HLA-C）酶联免疫分析说明书
试剂盒组成
1 20倍浓缩洗涤液 30ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（180μg/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120μg/L，80μg/L ，40μg/L，20μg/L， 10μg/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
人类白细胞抗原C（HLA-C）酶联免疫分析说明书
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
检测范围：
5μg/L -150μg/L
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
人淋巴细胞因子ELISA试剂盒
人胸腺活化调节趋化因子（TARC/CCL17）ELISA试剂盒
人神经细胞粘附分子配体1（NCAM-L1/CD171）ELISA试剂盒
人神经保护因子（CVNPF）ELISA试剂盒
人可溶性肿瘤坏死因子α受体（sTNFαR）ELISA试剂盒
人可溶性细胞因子受体（sCKR）ELISA试剂盒
人可溶性凋亡相关因子配体（sFASL）ELISA试剂盒
人细胞凋亡抑制因子（IAP）ELISA试剂盒
人集落刺激因子（CSF）ELISA试剂盒
人γ干扰素诱导单核细胞因子（MIGF/CXCL9）ELISA试剂盒
人干扰素诱导T细胞趋化因子（ITAC/CXCL11）ELISA试剂盒
人CD14分子（CDl4）ELISA试剂盒
人凋亡诱导因子（AIF）ELISA试剂盒
人白细胞共同抗原（LCA/CD45）ELISA试剂盒
人CD4分子（CD4）ELISA试剂盒
人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白（P-cad）ELISA试剂盒
人角化细胞生长因子（KGF）ELISA试剂盒
人血小板衍生生长因子BB（PDGF-BB）ELISA试剂盒
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