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重点介绍ELISA试剂盒样本处理及要求

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上传时间：2014/3/7 9:45:31

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上 传 者：北京杰辉博高生物技术有限公司

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重点介绍elisa试剂盒样本处理及要求

ELISA试剂盒产品的优劣主要是从其特异性，准确性，精确度等几个方面进行判断.由于篇幅关系，现对产品特异性进行详细讲解：

特异性指的是在PCR扩增过程中，专一性地扩增目的片段而非其他片段的性能。在PCR实验本身的灵敏度很高，且实验条件未充分优化的情况，通常会在目的片段出现的同时伴随有其他的杂带，即发生非特异性扩增的现象。模板、引物性质及质量、反应条件的控制等均会影响PCR扩增的特异性。近年来的研究结果表明，缓冲液的品质（如离子种类与组成，反应优化剂等）对保证PCR的特异性扩增起着不可忽视的作用。一般的缓冲液中调节氢键作用的盐只有KCl，而东盛HSTMTaqMix的缓冲体系通过反应优化剂以及KCl/（NH4）S

PCR实验的灵敏度与特异性是一对此长彼消的特性，这也决定我们实验体系调节实际就是找到适合实验的灵敏度与特异性的平衡点。由于PCR体系中的众多成分，使得组合较多，筛选工作繁杂。东盛基于灵敏度与特异性分别设计了PCRMix和HSTaqMix，帮您确定大的平衡点，如果您需要更细致的平衡点，请选择相应的MixKit系列进行微调。

ELISA操作实验中的样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加进一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加进一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

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