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怎样从基因库中选基因

点击次数:593 发布时间:2012/6/15 8:48:32

对于植物、动物,所需要的克隆数很大,鉴定目的基因是一项艰巨的任务。对于这些生物体,可以使用细胞特异的cDNA文库。cDNA文库是将mRNA反转录成cDNA,插入载体中构建的文库。每一个细胞都含有相同的基因,但不同细胞中有的基因是表达的, 而有的基因关闭。只有少量基因在所有的细胞类型中都表达,利用mRNA构建的基因文库,只含有表达的部分基因。例如麸朊(醇溶朊),小麦中的一种营养蛋白,在正发育的种子中,以非常高的水平表达,大约占总mRNA的30%。

2.2 克隆的鉴定方法
筛选目的克隆最常用的方法是探针杂交法。
探针是由目的基因的已知的信息决定的,有三种可能性:1) 目的基因在特定细胞中的丰度 2) 基因所编码的蛋白质或者部分序列  
3) 基因是一个基因家族中的一个

 

2.2.1 利用同源探针筛选目的克隆
任意的两条单链核酸分子都有可能通过碱基配对结合,大部分的配对分子是不稳定的,因为只有少量的碱基配对。然而如果两条链是互补的,大部分碱基可以配对形成稳定的分子。不仅DNA间可以配对,DNA 与RNA间也可以进行配对。因此可以使用同源探针筛选目的克隆。

如果克隆的基因所编码的蛋白已知。就可以利用遗传密码子预测相关基因的核苷酸序列,只有蛋氨酸和色氨酸无兼并密码,其他的氨基酸至少有两种密码子。例如丙氨酸有四种密码子,前两位是相同的,GCA,GCT,GCC,GCG,只能正确的预测两位的碱基。

 

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