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牛β羟丁酸（βOHB）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

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上传时间：2012/4/26 9:50:01

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上传者：上海沪宇生物科技有限公司

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检测范围： 96T
0.4μmol/L-24μmol/L

使用目的：
本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中β羟丁酸（βOHB）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛β羟丁酸（βOHB）水平。用纯化的牛β羟丁酸（βOHB）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β羟丁酸（βOHB），再与HRP标记的β羟丁酸（βOHB）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β羟丁酸（βOHB）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛β羟丁酸（βOHB）浓度。
试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（48μmol/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
24μmol/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μmol/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μmol/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μmol/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μmol/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
1.准备试剂，样品和标准品
2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟
3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟
4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟
5.加入终止液
6.15分钟之内度OD值