离心机用于酵母蛋白的提取

1、 准备SD/-Leu或是YPD 培养基20ml，酵母过夜培养，30℃，230rpm。

2、 测OD600 约1.0。
3、 100ml过夜培养物，1000g，冷冻离心机离心5min，温度设置为4℃（湘智公司所有的冷冻离心机都可以满足上述条件）。
4、 离心机离心后溶液中清除上清，重悬于80ul抽提buffer：
0.1M Tris-Cl（PH7.5），0.2M NaCl，0.01Mβ-ME，20％甘油，5mM EDTA，1mM PMSF。（100×）：PMSF 0.1742g 溶于10ml 异戊醇（主要抑制丝氨酸蛋白激酶）， RT保存。
5、 转移上清到一预冷的玻璃管中，再加入玻璃珠33ul（425-600um）。冰上操作，涡流10min，但不包括样品的预冷时间。
6 、回收玻璃珠，并尽可能取上清到另一预冷的玻璃管中。
7、 40ul的抽提buffer，同上涡流。
8、离心机离心后分离上清（回收玻璃珠）。
9、液氮快速冷冻，-70℃储存。
10、 提取的蛋白量通常约10-20mg/ml, 2-5ul用于实验。

原创作者：上海秦帅机电设备有限公司