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六种方法鉴定单克隆抗体的性质
点击次数：5340 发布时间：2015/10/15 8:46:56
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冯**
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当获得多个杂交瘤细胞株时，要了解哪一株是最适用的，则一定要通过各种鉴定。常见的方法有：
（一）Ig类型测定
通常以免抗小鼠Ig类及亚类抗体与培养液中单克隆抗体按双向琼脂扩散法进行测定，确定其Ig类型或Ig亚类型别。
（二）特异性测定
把与相应抗原有关的物质同McAb进行多种免疫学检测，鉴定McAb的特异性。这直接关系到McAb应用的可靠性。
（三）抗体效价测定
效价以腹腔积液或培养液的稀释度表示，稀释度越高，则抗体效价也越高。在凝集反应中，腹腔积液效价可达5万以上；在ELISA中，腹腔积液效价可达100万以上。如ELISA效价低于10万，用于诊断测定将不会达到很高的敏感度，应重新制备。
（四）表位测定
通过双向琼脂扩散法，把两种McAb混合，加入于同一孔中，对孔放相应的抗原，如出现两条沉淀线可证明两者为抗不同表位的McAb；利用ELISA双抗夹心法，将一种McAb作包被抗体，另一作酶标记，其中加入抗原，如显色，则证明两者抗不同的表位。
（五）亲和力测定
只有当抗原与抗体结合部位结构完全吻合时，抗体的亲和力最大。这种结合力以抗原抗体反应平衡时，抗原与抗体浓度的乘积与抗原抗体复合物浓度之比表示。如亲和力太低，会严重影响测定的敏感性。
（六）染色体分析
正常鼠的脾细胞染色体数：40，全部为端着丝粒；小鼠骨髓瘤细胞染色体：SP2／0细胞为62—68，NS-1为54～64。大多数为非整倍性，有中部和亚中部着丝点。杂交瘤细胞的染色体数目接近两亲本细胞染色体数目的总和，在结构上多数为端着丝粒染色体外．还应出现少数标志染色体。染色体数目多且较集中的杂交瘤细胞分泌高效价的抗体。
（一）Ig类型测定
通常以免抗小鼠Ig类及亚类抗体与培养液中单克隆抗体按双向琼脂扩散法进行测定，确定其Ig类型或Ig亚类型别。
（二）特异性测定
把与相应抗原有关的物质同McAb进行多种免疫学检测，鉴定McAb的特异性。这直接关系到McAb应用的可靠性。
（三）抗体效价测定
效价以腹腔积液或培养液的稀释度表示，稀释度越高，则抗体效价也越高。在凝集反应中，腹腔积液效价可达5万以上；在ELISA中，腹腔积液效价可达100万以上。如ELISA效价低于10万，用于诊断测定将不会达到很高的敏感度，应重新制备。
（四）表位测定
通过双向琼脂扩散法，把两种McAb混合，加入于同一孔中，对孔放相应的抗原，如出现两条沉淀线可证明两者为抗不同表位的McAb；利用ELISA双抗夹心法，将一种McAb作包被抗体，另一作酶标记，其中加入抗原，如显色，则证明两者抗不同的表位。
（五）亲和力测定
只有当抗原与抗体结合部位结构完全吻合时，抗体的亲和力最大。这种结合力以抗原抗体反应平衡时，抗原与抗体浓度的乘积与抗原抗体复合物浓度之比表示。如亲和力太低，会严重影响测定的敏感性。
（六）染色体分析
正常鼠的脾细胞染色体数：40，全部为端着丝粒；小鼠骨髓瘤细胞染色体：SP2／0细胞为62—68，NS-1为54～64。大多数为非整倍性，有中部和亚中部着丝点。杂交瘤细胞的染色体数目接近两亲本细胞染色体数目的总和，在结构上多数为端着丝粒染色体外．还应出现少数标志染色体。染色体数目多且较集中的杂交瘤细胞分泌高效价的抗体。
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