人P-选择素（P-selectin）ELISA试剂盒说明书

用途：
本试剂盒用于定量测定人血清或血浆中的P-selectin浓度。

试剂盒组成：
酶标板（Coated Wells） 96wells Anti-P-selectin Biotin 22ml
样品稀释液 25ml 标准品（Standards） 1 set
TMB显色液 11ml HRP 22ml
终止液（Stop Solution） 10ml 浓缩洗涤液（20x） 25ml
标准品已经稀释10倍

需要但未提供的材料
1. 可在450nm处进行读数的酶标2. 仪；
3. 能精确吸取10 和200µL的移液器；
4. 可调多道（8）移液器（50－5. 200µL）；
6. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；
7. 洗瓶或洗板机；
8. 蒸馏水或去离子水；
9. 1升的圆柱形量筒；
10. 血清移液器：1和（10或25 mL）；
11. 移液器枪头；
12. 纸巾；
13. 计时器，14. 用以监控温育步骤；
15. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；

注意事项:
严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
在储存和温育时避免强光直接照射。
平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
不能使用过期产品。
如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

样品：
在此检测中，可使用人血清或血浆样品。

准备工作：
样品稀释10倍（10ul血清或血浆加90ul样品稀释液）,标准品不稀释。
浓缩洗涤液（20X）用双蒸水稀释成1X（至500ml）。

操作步骤：
试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。
取出所需反应板。
分别加入5ul标准品（Standards）、5ul已稀释血清或血浆于反应板孔中，轻轻混匀10秒。
每孔加入200ul Biotin anti P-selectin，轻轻混匀30秒。37°C温育30分钟。
洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板，并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；这样反复洗涤5次。
每孔加入200ul HRP,轻轻混匀10秒。37°C温育30分钟。
洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板，并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；这样反复洗涤5次。
每孔加入100ul TMB显色液，轻轻混匀10秒钟，置暗处室温温育20分钟。
每孔加入100ul终止液（Stop Solution）。轻轻混匀30秒；15分钟内在450nm处读OD值。

以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清或血浆样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。（曲线适用：y=ax2+bx+c）
标本的浓度 = 标准曲线上查出的浓度
检测范围：
1.56 ng/mL -100 ng/mL
说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．有效期：6个月
3．浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
5．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

原创作者：上海锐聪实验室设备有限公司