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达兰科技新推出食物中胡萝卜素的测定方法的检测原理
点击次数：740 发布时间：2012/11/27 10:03:21
| 此外介绍纸层析法和柱色谱法 一、纸层析法 1.原理 以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分离，剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。 2.适用范围 参照GB12389-90。本方法适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定，其最小检出限为0.11μg。 3.仪器和设备 （1） 实验室常用设备。 （2） 玻璃层析缸。 （3） 分光光度计。 （4） 旋转蒸发器：具150ml球形瓶。 （5） 恒温水浴锅。 （6） 皂化回馏装置。 （7） 点样器或微量注射器。 （8） 滤纸。 4.试剂 除特殊说明外，实验用试剂为分析纯，水为蒸馏水。 4.1 石油醚（沸程30～60℃）：同时是展开剂。 4.2 无水硫酸钠：分析纯。 4.3 5%硫酸钠溶液。 4.4 1+1氢氧化钾溶液：取50g氢氧化钾溶于50ml水。 4.5 无水乙醇：需脱醛处理。 （1） 检验乙醇是否含醛： 银氨液：加浓氨水于5%硝酸银液中，直至氧化银沉淀溶解，加入2.5mol/L氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加浓氨水使之溶解。 银镜反应：加2ml银氨液于试管内，加入几滴乙醇摇匀，加入少许2.5 mol/L氢氧化钠溶液加热。如乙醇中无醛，则没有银沉淀，否则有银镜反应。 （2）脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇中，将两者倾入1L乙醇中，摇匀，静置一、两天，将上层清液倾入蒸馏瓶中，蒸馏，弃去初蒸的50ml。（注：蒸馏速度控制在1滴/秒。） 4.6 β-胡萝卜素标准贮备液：取5mgβ-胡萝卜素标准品，溶于10ml三氯甲烷中，浓度约为500μg/ml，准确测其浓度。 （1） 标定： 取标准溶液10.0μl， 加正己烷3.00ml， 混匀。测其吸光度值，比色杯厚度为1cm，以正己烷为空白，入射光波长450nm，平行测定三份，取均值。 （2） 计算公式：
式中： X1－－胡萝卜素标准溶液浓度，mg/ml；
（注：配制标准溶液时，应注意标准品的结构是胡萝卜素还是胡萝卜素酯。通常标准品不能完全溶解于有机溶剂中，尤其是胡萝卜素酯，所以必要时应先将标准品进行皂化，再用有机溶剂提取，用蒸馏水洗涤至中性后，浓缩定容。再进行标定。由于胡萝卜素很容易分解破坏，所以每次使用前标准品均需标定，且测定样品时需带标准品同步操作。） |
