高效液相色谱法测定淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量

摘要：淫羊藿苷为箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿等干燥茎叶提取物。本品呈淡黄色针状结晶粉末，分子量为676.65。

目的建立淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为ZorbaxSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈-水（25︰75，V/V），流速1.0mL/min；检测波长270nm。结果淫羊藿苷的进样量与其峰面积积分值在0.09984～0.59904μg范围内有良好的线性关系（r＝0.9998），平均加样回收率为97.77%，RSD＝1.77%（n＝6）。结论本法简便可行，准确可靠，可用于淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定。

「关键词」淫羊藿苷；淫黄胶囊；高效液相色谱法Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofthecontentoficariininYinhuangCapsules.MethodsTheHPLCassaywasperformedonaZorbaxSB-C18column（250mm×4.6mm，5μm）withthemobilephaseofacetonitrile-aquous（25︰75，V/V）ataflowrateof1.0mL/min，andthedetectivewavelengthwas270nm.ResultsAgoodlinearityoficariinwasobtainedintherangeof0.09984～0.59904μg（r＝0.9998）.Theaveragerecoverywas97.77%andRSDwas1.77%（n＝6）.ConclusionThemethodissimple，feasible，accurateandreliable.ItcanbeappliedtothedeterminationoficariininYinhuangCapsules.Keywords：icariin；YinhuangCapsules；HPLC淫黄胶囊是由淫羊藿、黄芪组成的中药复方制剂，具有补气健肾之功，主要用于治疗肾病综合征。该制剂中主要药味淫羊藿主要含有黄酮类、多糖，其中黄酮类成分淫羊藿苷为淫羊藿的主要特征性有效成分。为了有效控制该制剂的质量，本实验建立了以高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷含量的方法。

1仪器与试药Agilent1100高效液相色谱系统（自动脱气机、VWD检测器，美国产）。淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号0737-200111，供含量测定用）；淫黄胶囊（本院中药药剂实验室研制，批号20050509、20050523、20050606）。乙腈为色谱纯（美国Tedia公司）；水为注射用水；其余试剂均为分析纯。

2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：ZorbaxSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（25︰75，V/V）；流速：1.0mL/min；检测波长：270nm。理论塔板数按淫羊藿苷计算不低于2500。

2.2检测波长的确定取淫羊藿苷对照品适量，用50%乙醇溶解、稀释成浓度约为1mg/mL的溶液，以50%乙醇为空白，在400～200nm波长范围内扫描，结果淫羊藿苷在270nm波长处有最大吸收。

2.3标准曲线的制备精密称取淫羊藿苷对照品10.40mg，置50mL量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为208.0μg/mL的对照品储备液。分别从中精密吸取0.6、1.2、1.8、2.4、3.0、3.6mL置于25mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，得系列浓度的对照品溶液。分别精密吸取各浓度对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以淫羊藿苷进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y＝－5.953＋2107.944X，r＝0.9998。结果表明，淫羊藿苷进样量在0.09984～0.59904μg范围内与其峰面积积分值有良好的线性关系。

2.4供试品溶液的制备取淫黄胶囊10粒内容物，研细，取细粉约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，称定重量，超声处理（功率200W，频率59kHz）45min，放置，冷至室温，称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4mL置水浴上蒸干，加水10mL溶解，以乙酸乙酯萃取3次，每次10mL，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂至干，残渣加50%乙醇溶解并定容至25mL量瓶中，摇匀，即得供试品溶液。

2.5阴性干扰试验按处方制法制备缺淫羊藿的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别吸取淫羊藿苷对照品溶液（14.976μg/mL）、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图（见图1）。结果表明，在淫羊藿苷色谱峰位置处阴性无干扰。

2.6精密度试验精密吸取淫羊藿苷对照品溶液（14.976μg/mL）20μL，注入液相色谱仪，重复进样5次。结果峰面积积分值RSD＝1.03%，表明精密度良好。

2.7稳定性试验取同一份供试品溶液（批号20050509），分别于0、2、4、6、8h时进样20μL，按上述色谱条件测定，峰面积积分值RSD＝1.39%。结果表明，供试品溶液中淫羊藿苷至少在8h内稳定性良好。

2.8重复性试验取同一批淫黄胶囊（批号20050509）5份，分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液，进样20μL，按上述色谱条件测定，计算淫羊藿苷含量，结果RSD＝2.92%。

2.9加样回收率试验取已测定含量的淫黄胶囊（批号20050509）内容物，研细，称取6份，各约0.1g，精密称定，分别精密加入淫羊藿苷对照品储备液（208.0μg/mL）5mL，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。表1加样回收率试验结果（略）

2.10样品测定取淫黄胶囊样品3批，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，进样20μL，按上述色谱条件测定，采用外标法计算淫羊藿苷含量，结果见表2。结合《中华人民共和国药典》标准规定淫羊藿药材中淫羊藿苷含量不低于0.5%[1]，暂定本品每1g含淫羊藿苷不低于8mg。表2淫羊藿苷含量测定结果（略）

3讨论在供试品溶液制备中，曾分别比较了不同提取方式（回流法提取、超声法提取）及其不同提取时间（15、30、45、60min）对淫黄胶囊样品中淫羊藿苷的提取效率，结果两种方式提取的效果基本一致。文中所选用的超声法提取操作简便，超声45min可将样品所含的淫羊藿苷提取完全。因该超声提取法同时提取出较多杂质，本试验根据淫羊藿苷的溶解性质[2]，再将提取液以乙酸乙酯提取、纯化，结果能使供试品溶液中杂质大大减少，在保证被测成分提取完全的同时，减少了样品对色谱柱的污染。对于流动相，将《中华人民共和国药典》[1]中淫羊藿药材含量测定项中的流动相调整为乙腈-水（25︰75，V/V），即可得到满意的色谱分离效果。本试验所建立的供试品溶液制备方法简便、易行，含量测定方法准确、可靠，可用作淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。

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