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如何选择一根合适的液相色谱柱？
点击次数：875 发布时间：2021/6/2 9:56:21
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姜*
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如何知道应该选用什么色谱柱是实验中很重要的部分，一些实验分析只能选定一种特定的色谱柱，有的分析方法虽然可以选用相同的色谱柱也可以工作，但对实验结果可能会存在一定的问题。所以选择的色谱柱是否正确，是否经过色谱仪方法调试后可以直接使用，色谱柱的选择对分析方法是否成功是非常重要的问题！本次小编带大家一起学习色谱柱的选择。二、在选择合适的色谱柱时，需要考虑很多因素： 选择色谱柱，先需要确定要使用的是填充柱还是毛细管柱。填充柱比毛细管柱具有更高的样品容量，虽然这一差距由于发明了大孔 530mm 毛细管而大大缩小。检测器灵敏度的改进也减少了对大剂量样品的需要。填充柱可能具有优势的域是气体样品的分析。现代液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。 毛细管柱 1、色谱柱材料：这种材料必须尽可能是惰性的，尤其是对于痕量分析或容易拖尾的化合物，例如硫醇或类似的活性化合物。对于毛细管柱，熔融石英是可选的材料。 有两种类型的熔融石英毛细管柱：壁涂开管柱 (WCOT) 色谱柱和多孔层开管柱 (PLOT) 色谱柱。WCOT 色谱柱是固定相液膜涂渍在去活的色谱柱壁上。这是气相色谱中较常用的色谱柱。PLOT 色谱柱中固定相是固体物质涂渍到色谱柱壁上。 2.固定相：选择毛细管柱时，先需要确定是否需要 PLOT 色谱柱。下面是 3 种 PLOT 色谱柱的典型应用域：分子筛不挥发气体，对水比较敏感二乙烯基苯 (DVB) — HP-PLOT Q C1 到 C3 全部异构体的分离，部分 C4 和更高的（直到 C14）的异构体分离，性化合物，挥发性溶剂可以允许含水氧化铝 Al2O3 C1 到 C10 异构体的分离, 对水比较敏感。 填充色谱柱 正相色谱：正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的性大小，即性强弱的组份先被冲洗出。 反相色谱：反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有性相对较弱的官能团的键合相。 反相色谱所使用的流动相性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品检测出的顺序是性较强组合先被冲出，而性弱的组份会在色谱柱上有 更强的保留。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。 聚合物填料：聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离有帮助。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。 其他无机填料：其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化锆填料也可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。
一、色谱柱选择一般方法
色谱柱选择一般有药典方法、国标或者行业监测标准的，先可以按照方法来选产品，也可以向供应商请求技术支持；如果没有固定的方法需要自己开发，可以查一些文献，看看之别人做的时候用的什么柱子，再做个对比选择，如果实在没有参考的话，就需要按照色谱柱选择原则来选。
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选择一个固定相，根据分析对象的选择性、性和固定相分子中苯基含量进行仔细判定；
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要了解色谱柱直径如何影响柱效、溶质保留值、柱头压和载气流速等因素；
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确定多长的柱长会影响溶质的保留值、柱头压及成本；
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从柱容量、惰性、流失和温度上限出发，正确评估薄、厚液膜色谱柱的不同。
原创作者：天津谱祥伟业科技有限公司
