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HPLC新手入门
点击次数：856 发布时间：2021/5/11 10:20:34
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姜*
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HPLC对于多数人来说都是很好上手的仪器，但就算是用过几年、经验丰富的分析员都会习惯于些错误的操作（辈教错了？），经常导致些仪器故障。其实液相分析过程中有哪些不可少的步骤，哪些操作不能做？哪些懒儿不能偷？那些小概率的故障辈没教怎么办？天我们道来。
没有流动相流出，又无压力指示怎么办？
压力为啥过高或过低？
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来些特殊问题，必须充分重视：
PS：（在液相色谱中对组分复杂的样品采用梯度洗脱的方法。在同个分析周期中，按定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。）
②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。
③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
调节流速太快。。。
避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如所述）。
反冲色谱柱。。。
般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
预柱和保护柱。。。
选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器面连接预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接保护柱。保护柱般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
原创作者：天津谱祥伟业科技有限公司
