JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位荧光探针

简要介绍

JC-10是一种替换JC-1，用于检测线粒体膜电位△Ψm的荧光探针。JC-10以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。

正常线粒体内，JC-10聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=540 nm, Em=590 nm）；

不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10 只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=490 nm, Em=525 nm）。

JC-10不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以直接反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

JC-10可用来检测大量细胞类型如神经元和心肌细胞的线粒体膜电位，也可用来研究细胞生理活动，比如ATP合成，活性氧（ROS）和凋亡发生等。

物理性质

【化学名称】：5,6-Dichloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide

【分子式】：C25H27Cl2IN4

【分子量】：~600

【状态】：红色粉末

【溶解性】：DMSO

【纯度】：≥95%

【储存条件】：-20℃避光干燥

使用方法

【染色工作液制备 】

JC-10储存液制备：取本品溶于无水DMSO配制成2mg/ml储存液（比如5mg JC-10加入2.5ml DMSO），混匀后，按照单次用量分装，避光冻存，避免反复冻融。

JC-10（1×）工作液制备：取一管JC-10储存液置于室温，使其融化，之后用HHBS或其他缓冲液配制成10-30µM的1×工作液，漩涡混匀待用。

注：对于某些细胞系pH8的工作液可能防止JC-10泄露。

【JC-10染色步骤（荧光酶标仪）】

1）用待测药物处理细胞一段时间（比如，Jurkat细胞用喜树碱camptothecin）处理4-6h）以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的药物缓冲液。

2）按照100µl/孔/96孔板或25µl/孔/384孔板的量加入JC-10工作液到培养孔内。

3）将整个培养板置于37℃，5% CO2孵育15-60min。

4）用荧光酶标仪监测Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化，计算两者荧光信号比值，以判断细胞健康程度。

注：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议调整孵育时间。

可选：吸掉JC-10染色工作液，按照100µl/孔/96孔板或25µl/孔/384孔板的量加入HHBS缓冲液或其他生理缓冲液，然后再进行荧光信号分析。

【JC-10染色步骤（荧光显微镜或流式细胞仪）】

1）用待测药物处理细胞一段时间（比如，Jurkat细胞用喜树碱camptothecin）处理4-6h）以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的药物缓冲液。

2）离心去上清，调整细胞密度为1-5×105细胞/管。

3）用500µl JC-10染色工作液重悬细胞。

4）室温孵育或37℃，5%CO2孵育10-30 min，避光。

5）用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化；或者用流式细胞仪（FL1和FL2通道进行检测）。

注：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议调整孵育时间。

可选：离心后吸掉JC-10染色工作液，加入500µl HHBS缓冲液或其他缓冲液重悬细胞使其密度为1-5×105细胞/管，然后再进行荧光分析。

注意事项

储存与稳定性：

避光保存于-20℃，避免反复冻融，有效期通常为12个月。

染色后需在30分钟内完成检测，避免荧光信号衰减。

细胞依赖性：不同细胞系对JC-10的响应可能存在差异，需优化孵育时间及浓度（如HeLa细胞与Jurkat细胞条件不同）。

安全防护：操作时需佩戴手套，避免直接接触强光或高温环境。