BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM) pH荧光探针

产品信息

其他名称：BCFLAM ester;BCFLAcetoxymethyl Ester;

产品名称：BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM) pH荧光探针

分子量：~600

Ex/Em：503/528nm

溶解性：溶于DMSO

光谱特性：

pKa值：约7.0，与BCECF AM相同，可用于胞质中性pH环境（6.8⁻⁷.4）的检测。

双激发性：具有pH依赖性双激发光谱，激发交点为454 nm，激发波长分别为454 nm和503 nm，发射波长为528 nm。

比率成像：通过双激发波长（如440/490 nm或454/503 nm）的荧光强度比值计算pH值，减少染料浓度、光漂白、细胞泄漏等因素的干扰。

使用方法

试剂准备

1. 10% Pluronic F-127母液配制

A.将1g Pluronic F-127溶于10ml去离子水，配制成10%（w/v）母液。

B.溶解过程中于40~50℃内加热10% Pluronic F-127母液30min，使其完全溶解。

C.10% Pluronic F-127母液室温保存，高达6个月稳定，不要冻存。 2. HHBS Buffer或其他生理缓冲液

2. 丙磺舒或水溶性丙磺舒

操作步骤

【注意】：

以下实验步骤中用到非离子表面活性剂Pluronic F-127和有机阴离子转运抑制剂丙磺舒（Probenecid）。

1. 制备BCFLAM母液：

于实验前，将低温保存的BCFLAM粉末置于室温回温至少20min。低速离心后加入无水DMSO配制成10~20mM母液。

【比如：1mgBCFLAM粉末加入166µl DMSO溶解，混匀后即得到10mM母液。多余的母液根据单次用量分装，避光冻存，约3个月稳定】

2. 用HHBS或其他的生理缓冲液制备2×工作液（含10µMBCFLAM和0.08%Pluronic F-127），

【比如，在管子内混合6.4µlBCFLAM（10mM储存液）和51.2µl1 0%Pluronic F-127。之后，添加HHBS或其他生理缓冲液直到总体积为6.4ml。】

【注意】：对于大部分的细胞系，建议BCFLAM的工作浓度为4~5µM。Pluronic F-127的终浓度建议为0.02~0.04%。

3. 吸取100µl2×工作液到含100µl细胞培养基的培养孔内，混匀，使得BCFLAM的终浓度为5µM和Pluronic F-127的终浓度为0.04%。

4. 置于37℃孵育30~60min。之后置于室温孵育30min。

5. 吸走200µl染色液，之后重新加入含1mM丙磺舒的HHBS Buffer或其他生理缓冲液。

6. 添加化合物到检测孔内。之后通过荧光检测来进行pH分析。

【单波长检测：Ex/Em=490/535nm（cutoff=515nm）；或比率测定 Ex/Em=505/535nm和430/535nm（cutoff=515nm）】

注意事项

1）荧光染料都存在淬灭问题，操作或保存过程中尽量避光，减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。