CAS号：1003197-00-9，活细胞荧光探针：MitoSOX Red的溶液如何配置？

引言/前言

MitoSOX Red is a live cell fluorescent probe that specifically targets mitochondria and is cell membrane permeable. MitoSOX Red enters mitochondria and is oxidized by superoxide but not by other ROS or RNS generating systems. The oxidized MitoSOX Red then binds to nucleic acids in mitochondria/nucleus, producing strong red fluorescence. MitoSOX Red can be used as a fluorescent indicator to specifically detect superoxide. In addition, superoxide dismutase (SOD) can prevent the oxidation of MitoSOX Red.

MitoSOX Red 是特异靶向线粒体的活细胞荧光探针，具有细胞膜渗透性。MitoSOX Red 进入线粒体后会被超氧化物氧化，而不会被其他 ROS 或 RNS 生成系统氧化。被氧化的 MitoSOX Red 随后与线粒体/细胞核内的核酸结合，产生强红色荧光。MitoSOX Red 可以作为荧光指示剂，特异性检测超氧化物。另外，超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase，SOD) 能够预防 MitoSOX Red 氧化。

基本信息标识

CAS号：1003197-00-9

中文名称：线粒体超氧阴离子红色荧光探针

英文名称：MitoSOX Red

分子量：759.70

分子式：C43H43IN3P

性状：固体

颜色：Yellow to brown

Emission (Em)：580

Excitation (Ex)：510

纯度：≥95%

结构式：

运输：低温运输

保持条件：-20℃长期保存，避光，干燥。

注意事项：取用一定要干燥，避免频繁的溶解和冻干。

安全信息：

使用时应注意个人防护，如戴防护手套、护目镜等。

避免吸入其粉尘，避免接触皮肤和眼睛。

一、溶液配制

1. MitoSOX Red 母液配制

将 MitoSOX Red 溶解于 DMSO 中，配制成 1–10 mM 的母液（具体浓度可根据实验需求优化）。

2. 工作液配制

用适当缓冲液（如无血清培养基或 PBS）稀释母液，获得 1–10 µM 的工作液（最终浓度需根据细胞类型和实验条件调整）。

3. 对照试剂设置

以超氧化物歧化酶（SOD）作为负对照（SOD 可清除超氧化物，抑制 MitoSOX Red 氧化）。

细胞标记实验流程

1. 细胞培养

将细胞接种至适宜培养器皿（如培养皿、盖玻片或多孔板）中，于37°C、5% CO₂条件下培养24–48小时，至细胞充分贴壁并生长至合适密度。

2. MitoSOX Red染色

向培养体系中加入预先配制的工作浓度MitoSOX Red溶液，轻柔混匀后置于37°C孵育10–30分钟（染色时间需根据细胞类型优化）。

3. 洗涤

孵育结束后，用预温的PBS轻柔洗涤细胞2–3次，去除未结合的MitoSOX Red探针。

4. 荧光检测

检测参数：

激发波长：510 nm

发射波长：580 nm

检测方法：

使用荧光显微镜或流式细胞仪，配备对应波长的滤光片检测红色荧光信号。

结果解读：

荧光强度与线粒体内超氧化物水平呈正相关：高荧光强度提示超氧化物水平升高，低荧光强度则表明超氧化物水平较低。

5. 实验对照设置

阳性对照：

加入已知氧化应激诱导剂（如Paraquat或Rotenone），诱导细胞内超氧化物生成，验证MitoSOX Red的检测灵敏性。

阴性对照：

加入线粒体靶向超氧化物清除剂Mito-TEMPO，抑制超氧化物氧化MitoSOX Red，确认荧光信号的特异性。

6. 定量分析

流式细胞术：

收集细胞后通过流式细胞仪检测单个细胞的荧光强度，适用于大样本量细胞的超氧化物水平定量分析。

图像分析：

通过荧光显微镜采集图像后，利用图像处理软件（如ImageJ）进行荧光强度半定量分析，辅助定性评估。

相关试剂

THPTA ligand

Cyanine7 azide

Azide-PEG2-amine

BDP FL carboxylic acid

R6G alkyne, 6-isomer

LumiTracker ER Green

Cyanine7 NHS ester

Cyanine3B NHS ester

DMS(O)MT aminolink C6

sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester

sulfo-Cyanine3.5 carboxylic acid

QuDye dsDNA HS Reagent, 200x

LumiMAG Genomic DNA Blood and Buccal Kit

Fluo-4 AM, green fluorescent calcium indicator

本试剂由西安强化生物科技有限公司XAJ精心整理！本试剂只用于科研用途，特此声明！！！

原创作者：西安强化生物科技有限公司