2′,7′-双(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素（BCECF acid）的使用方法是什么？

Ⅰ、【简要描述】

BCECF Acid 是一种双激发比率型 pH 荧光探针，其 pKa 约为 6.97–6.98，接近生理 pH 范围（6.8–7.4），能灵敏检测细胞内 pH 在 6.0–8.0 之间的变化。其激发光谱随 pH 变化而偏移，但发射峰位置不变（535 nm），通过计算 490 nm（pH 敏感）与 440 nm（pH 不敏感）激发下的荧光强度比值，可准确量化 pH 值

Ⅱ、【基本介绍】

CAS号：85138-49-4

中文名称：2′,7′-双(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素；BCECF PH指示剂；

英文名称：2′,7′-Bis(2-carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein；BCECF,酸；BCECF acid；BCECF pH Indicators；BCECF Acid pH indicator

分子式：C27H20O11

分子量：520.44

闪点 ：318.3±27.8 °C

沸点：936.2±65.0 °C at 760 mmHg

极化度：49.8±0.5 10-24cm3

密度 ：1.6700

纯度：95%+

商家：西安强化生物科技有限公司

结构式：

储藏条件：-20°C干燥避光保存

操作规范

实验防护：操作时需穿戴一次性实验服及手套，避免直接接触试剂，确保实验人员安全。

温馨提示：该试剂只用于科研

Ⅲ、【如何使用温馨提示：仅供参考）】

溶液配制：

用无水 DMSO 配制 1–10 mM 储备液，分装避光保存（-20°C）。

工作液浓度通常为 2–50 μM（用缓冲液稀释）。

细胞加载：

酸形式（BCECF Acid）：需微注射、电穿孔或划痕标记加载。

酯形式（BCECF-AM）：直接孵育（1–10 μM，37°C 30 分钟），胞内酯酶水解后生成荧光酸形式。

校准与检测：

使用尼日利亚菌素（nigericin）和高 K⁺ 缓冲液构建 pH 校准曲线。

检测时采集 490 nm/440 nm 激发下的 535 nm 发射光强度，计算比值并转换为 pH

Ⅳ、【BCECF pH Indicators 的实验注意事项】

1.实验前需戴好防护眼镜，穿戴防护服和口罩，佩戴手套，避免与皮肤接触；

2. BCECF开封前，适当的做离心，以保证粉末落入管底减少浪费；

3. 由于 BCECF 对湿度非常敏感，BCECF粉末保存过程中需要保持干燥条件下。BCECF 储存液需进行分装冻存密封存储管盖。避免重读冻融，影响产品活性；

4. BCECF工作液尽可能现配现用。

Ⅴ、【相关试剂】

AF 430 hydrazide

Cyanine5 maleimide

sulfo-Cyanine3.5 azide

TAMRA azide, 5-isomer

sulfo-Cyanine5 NHS ester

LumiCell Reticulocyte Stain

sulfo-Cyanine5 dimethyl

LumiZol RNA extraction reagent

LumiCell CDr20 Microglia Stain

BAPTA AM, calcium chelator

本试剂由西安强化生物科技有限公司XAJ精心整理！本试剂只用于科研用途，特此声明！！！

原创作者：西安强化生物科技有限公司