iFluor 488 -azide的描述与不同应用中的具体操作（超详细）

Ⅰ、【基本信息】

中文名：iFluor 488 叠氮化物

英文名：iFluor 488 azide，iFluor 488 N3，iFluor 488-N3；iFluor 488 -azide；iF488-azide；iF488-N3

激发峰： 490 nm

发射峰： 510–520 nm

分子量：716.57

溶剂：DMSO

商家：西安强化生物科技有限公司

纯度：：≥95%

特性：绿色荧光，与 FITC 类似但更稳定。其活性基团为叠氮基，用于点击化学修饰。

存储条件：在零下15度以下保存, 避免光照

注意事项：

在操作过程中，请穿戴一次性实验服，保证自身健康

该试剂只用于科研

Ⅱ、【试剂描述与不同应用中的具体操作】

iFluor 488 azide的核心价值在于其“点击”标记能力。它主要用于通过CuAAC反应，将荧光信号特异性地引入到预先通过代谢掺入或其他方式标记了炔烃基团的生物分子上。

不同应用中的具体操作

（1）流式细胞术：优化染料浓度（1-5 μM）和孵育时间（15-30分钟），避免过量标记导致细胞聚集。设置未标记对照组和仅炔基修饰组以排除非特异性信号。

（2）荧光显微成像：使用抗淬灭封片剂延长成像时间，优化曝光时间以避免光漂白。对于厚组织样本，可采用共聚焦显微镜提高分辨率。

（3）免疫组化：在固定和透化后的组织切片上，先用炔基标记一抗，再用iFluor 488 azide进行二抗标记，减少空间位阻影响。

Ⅲ、【常见问题与解决方案】

（1）信号弱或无信号：

原因：铜离子浓度不足、缓冲液变质、细胞固定通透不。

解决：确保使用新鲜二价铜缓冲液；增加BSA清洗次数；优化细胞固定与通透条件。

（2）背景高：

原因：染料与细胞内组分的非共价连接、自发荧光。

解决：增加BSA清洗次数；设置无染料或无点击反应对照以确认背景来源。

（3）DAPI信号减弱：

原因：点击反应中的铜离子使DNA少量变性，影响DNA染料结合。

解决：使用低铜离子浓度的Click-iT Plus EdU试剂盒。

Ⅳ、【相关试剂】

6-VIC,NHS酯

6-TET叠氮化物

5-dTMR,琥珀酰亚胺酯

CDCF 活性氧ROS荧光探针

Cy7NS acid Cy7NS 酸（Cy7-COOH）

Helix Fluor 555,N-羟基琥珀酰亚胺酯

Cyanine 3.5 monosuccinimidyl ester, potassium salt

5-TAMRA, SE [5-Carboxytetramethylrhodamine, succinimidyl ester]

本试剂由西安强化生物科技有限公司XAJ精心整理！本试剂只用于科研用途，特此声明！！！

原创作者：西安强化生物科技有限公司