使用AF 647 ConA进行植物细胞成像或细胞壁动态变化分析的过程是什么？

标题：AF 647 ConA

【参数信息】

英文名称：AF 647 ConA；Alexa Fluor 647 Concanavalin A

中文名称：AF 647 刀豆蛋白A；Alexa Fluor 647标记刀豆球蛋白A

激发波长：650 nm

发射波长：668 nm

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

AF 647 ConA由远红外荧光染料Alexa Fluor 647与植物凝集素刀豆蛋白A（ConA）通过共价偶联制备而成。

ConA来源于豆科植物刀豆（Canavalia ensiｆormis），是一种依赖钙离子/锰离子的糖结合蛋白，分子量约为104 kDa，通常以四聚体形式存在。

该探针结合了ConA对特定糖基的特异性识别能力与Alexa Fluor 647的高亮度、光稳定性和远红外荧光特性，适用于深层组织成像及低自发荧光背景的实验场景。

基本特性

光学性能：

激发/发射波长：650 nm/668 nm（远红光区），兼容 633 nm 激光激发。

高荧光亮度与光稳定性：磺酸基团增强水溶性和抗淬灭能力，适合长时间成像。

低背景干扰：近红外发射减少生物样本自发荧光，信噪比高。

生物结合特性：

ConA 可特异性识别末端 α-D-甘露糖、葡萄糖等糖基，结合细胞表面糖蛋白、糖脂或细胞内膜结构。

pH 依赖性聚合：中性/碱性条件下为四聚体（高亲和力），酸性条件（pH <5）下解离为二聚体。

【使用AF 647 ConA（Alexa Fluor 647标记的刀豆蛋白A）进行植物细胞成像或细胞壁动态变化分析的过程是什么？】

1. 样本准备

对于植物细胞，通常需要固定样本以保持结构完整性。

常用4%多聚甲醛（PFA）或3.7%甲醛溶液在室温下固定20分钟，随后用PBS缓冲液冲洗。

若需观察细胞壁动态变化，可跳过固定步骤，直接使用活体样本，但需确保染色条件不影响细胞活性。

2. 染色处理

将AF 647 ConA溶解于PBS缓冲液或细胞培养液中，工作浓度通常为1–10 µg/mL。

将样本浸入染色液中，室温孵育15–30分钟或10–15分钟。

孵育时间需优化以避免非特异性结合。

孵育后，用PBS缓冲液冲洗样本，去除未结合的ConA。

3. 显微镜成像

使用共聚焦显微镜进行成像，AF 647 ConA的激发波长为650 nm，发射波长为668 nm。

对于细胞壁动态分析，可结合时间序列成像记录荧光信号变化。

活体成像时需控制环境温度、湿度及CO2浓度以维持细胞活性。

可与其他荧光染料进行多通道成像，但需避免光谱重叠。

4. 动态分析应用

AF 647 ConA特异性结合细胞表面的甘露糖/葡萄糖残基，因此可用于追踪细胞壁多糖的合成、修饰或内吞作用。

例如，在拟南芥根尖生长过程中，通过连续成像可分析细胞壁扩展与多糖分布的关联性。

若需区分细胞壁与质膜，可结合质膜特异性染料或使用质壁分离处理。

【相关试剂】

iFluor 665 succinimidyl ester

LAMP Green 50X DMSO 溶液

锌离子荧光探针Zinquin AM

BCECF, AM pH荧光探针BCECF, AM

ReadiLink mFluor 620抗体标记试剂盒

ReadiLink mFluor 540抗体标记试剂盒

pH荧光探针Protonex Red 670，NHS 酯

Nuclear Violet LCS1 核紫 LCS1 活细胞染料

NBD-Cl [4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑

EDANS钠盐 [5-(2-氨基乙氨基)-1-萘磺酸钠盐

5-TAMRA azide 5-羧基四甲基罗丹明叠氮化物

6-ROX azide 6-ROX 6-羧基-X-罗丹明叠氮化物

Live or Dead 细胞活性检测试剂盒 绿色/红色双荧光

以上资料由西安强化生物科技有限公司xxn整理！

本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司