iFluor 488-PEG12-dUTP用于荧光原位杂交（FISH）的原理和步骤有哪些？

标题：iFluor 488-PEG12-dUTP

【参数信息】

英文名称：iFluor 488-PEG12-dUTP

中文名称：iFluor488-聚乙二醇十二乙二醇-脱氧尿苷三磷酸

分子量：2274.60

激发波长：495 nm

发射波长：515 nm

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

The dye-modified deoxyuridine 5'-triphosphates are one of the most common methods to produce dye-labelled DNA via the conventional enzymatic incorporation methods such as reverse tranｓcription, nick translation, random primed labeling, or PCR.

This enzymatic fluorescence labeling method is widely used for both FISH probes and microarray-based experiments.

This iFluor488-PEG12-dUTP conjugate has the same spectral properties to ChromaTide Alexa Fluor 488-dUTP.

Its PEG12 spacer makes it much more effectively incorporated into DNAs by polymerase.

It is used as a green fluorescence color with SpectrumGreen filter set.

It provides a bright signal that has high photostability and is not affected by pH.

染料修饰的脱氧尿苷 5'-三磷酸盐是通过常规酶促掺入方法（如逆转录、切口翻译、随机引发标记或 PCR）生产染料标记 DNA 的最常用方法之一。

这种酶促荧光标记方法广泛用于 FISH 探针和基于微阵列的实验。

该 iFluor488-PEG12-dUTP 偶联物具有与 ChromaTide Alexa Fluor 488-dUTP 相同的光谱特性。

其 PEG12 间隔区使其通过聚合酶更有效地掺入 DNA 中。

它用作带有 SpectrumGreen 滤光片组的绿色荧光颜色。

它提供具有高光稳定性且不受 pH 值影响的明亮信号。

【iFluor 488-PEG12-dUTP用于荧光原位杂交（FISH）的原理和步骤？】

荧光原位杂交（FISH）是一种分子细胞遗传学技术，用于在细胞或染色体水平上检测和定位特定DNA或RNA序列。

其原理基于核酸碱基互补配对原则：荧光标记的核酸探针与目标序列杂交后，通过荧光显微镜观察信号，从而分析基因的位置、数量或结构变化（如扩增、缺失或融合）。

FISH技术具有快速、灵敏度高、特异性强和多色检测能力等优点，广泛应用于肿瘤诊断、基因组研究和微生物鉴定等领域。

FISH的典型步骤包括：

样本制备：固定细胞或组织标本（如石蜡切片、冰冻切片或染色体分裂像），并进行透化处理以增加探针渗透性。

探针制备：使用标记的核酸探针（如iFluor 488-PEG12-dUTP标记的DNA探针），通过变性处理使双链探针变为单链。

杂交：将变性后的探针与样本在适宜温度（如37°C）下孵育，使探针与目标序列特异性结合。

洗脱：用甲酰胺/SSC缓冲液洗涤，去除未结合的探针，降低背景信号。

检测：通过荧光显微镜观察并分析荧光信号，必要时进行信号放大（如使用酪胺放大系统）。

iFluor 488-PEG12-dUTP在FISH中可作为直接标记探针的荧光底物，通过酶促反应整合到DNA探针中，实现绿色荧光信号的检测。其高稳定性和亮度有助于提高检测的准确性和分辨率，在多重FISH实验中与其他荧光染料（如iFluor 555或647）配合使用。

【相关试剂】

ATTO 633炔烃

ATTO 655炔烃

ATTO 680炔烃

ATTO 700炔烃

FastClick XFD350炔烃

FastClick XFD405 炔烃

Annexin V-iFluor 555标记

Annexin V-iFluor 594标记

LysoBrite 溶酶体橙色荧光探针

LysoBrite 溶酶体红色荧光探针

LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针

ATTO 488 acid ATTO 488酸 1443553-08-9

APC-XFD700 Tandem APC-XFD 700 串联染料

APC-iFluor 720 Tandem APC-iFluor 720 串联染料

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

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