Alexa Fluor 546标记伴刀豆球蛋白A的【使用方法】大公开！小白也能看懂

标题：AF 546 ConA，Alexa Fluor 546标记伴刀豆球蛋白A

【参数信息】

英文名称：AF 546 ConA；Alexa Fluor 546 Concanavalin A

中文名称：Alexa Fluor 546标记伴刀豆球蛋白A；AF546-伴刀豆球蛋白A

激发波长：556 nm

发射波长：573 nm

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

AF 546 ConA（Alexa Fluor 546 Concanavalin A）是一种荧光标记的凝集素复合物，广泛应用于生物医学研究中的细胞标记和成像领域。

AF 546 ConA是由Concanavalin A蛋白与Alexa Fluor 546染料通过共价偶联形成的复合物。其中：

ConA部分：是一种四聚体凝集素，分子量约104 kDa，特异性结合α-D-甘露糖（α-D-mannose）和α-D-葡萄糖（α-D-glucose）残基，常见于细胞表面的糖蛋白和糖脂。

Alexa Fluor 546部分：是一种橙红色荧光染料，激发波长（Ex）为556 nm，发射波长（Em）为573 nm，适用于TRITC滤光片系统，其量子产率高且光稳定性。

【使用方法】

（一）使用条件

储存条件：

AF 546 ConA应储存在-20°C、干燥、避光的环境中，避免反复冻融。建议将溶液分装为单次使用的小份以保持稳定性。

缓冲液要求：

ConA的结合活性依赖二价阳离子，使用时需在缓冲液中添加1 mM CaCl2和1 mM MnCl2以维持其糖结合特异性。常用缓冲液为PBS（pH 7.4）或HEPES缓冲液（pH 7.5）。

工作浓度：

对于活细胞或固定细胞染色，推荐起始浓度为5–10 μg/mL，具体需根据细胞类型和实验目标优化。免疫组化应用时浓度可能需调整至50–200 μg/mL。

光谱特性：

Alexa Fluor 546的激发/发射峰约为556/570 nm，适用于配备532 nm或561 nm激光器的荧光显微镜或流式细胞仪。需注意避免与其他荧光染料（如FITC/AF488）的光谱重叠。

（二）实验步骤（通用流程）

以下步骤基于荧光标记ConA的典型细胞染色协议：

样本准备：

细胞固定：用3.7%甲醛或4%多聚甲醛室温固定20分钟，PBS冲洗2次。

透化处理（如需胞内标记）：使用0.1% Triton X-100处理5分钟，PBS冲洗。

封闭：用4% BSA或血清封闭20–60分钟，降低非特异性结合。

探针孵育：

将AF 546 ConA用含Ca²⁺/Mn²⁺的缓冲液稀释至工作浓度（如5–10 μg/mL）。

滴加至样本上，室温或4°C避光孵育30分钟至2小时（时间需优化）。

清洗：

用PBS或HEPES缓冲液冲洗3次，每次5–10分钟，去除未结合探针。

成像与分析：

使用TRITC/Cy3滤光片组观察荧光信号。

可搭配核染色剂（如DAPI）进行多色成像。

（三）注意事项

对照设置：建议设置未染色样本及竞争抑制对照（如添加α-甘露糖）以验证特异性。

光保护：操作全程需避光，防止荧光淬灭。

适用性：该探针主要用于标记细胞表面α-甘露糖/葡萄糖结构（如糖蛋白、糖萼），适用于真菌、哺乳动物细胞的研究。

【相关试剂】

iFluor 488 炔烃

iFluor 488 TCO

iFluor 488 四嗪

iFluor 488琥珀酰亚胺酯

iFluor 488琥珀酰亚胺酯

iFluor 488马来酰亚胺

PE-iFluor 610 串联染料

Annexin V-iFluor 555标记

Annexin V-iFluor 594标记

iFluor 680 amine iFluor 680 胺

iFluor 680 hydrazide iFluor 680酰肼

iFluor 430 maleimide iFluor 430马来酰亚胺

APC-XFD750 Tandem APC-AF750 串联染料

以上资料由西安强化生物科技有限公司xxn整理！

本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司