iFluor 488 amine，iFluor 488胺的标记步骤是怎样的？有哪些关键特性与优势？

标题：iFluor 488 胺

【参数信息】

英文名称：iFluor 488 amine

中文名称：iFluor 488胺

分子量：805.61

激发波长：493nm

发射波长：519nm

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

iFluor 488 amine is a green fluorescent dye with an excitation/emission wavelength of approximately 493/519 nm. Its emission properties are similar to those of Alexa Fluor 488 or FITC, but it has advantages in light stability and brightness.

The terminal of dye molecule contains primary amine group, which can be used to react with electrophilic functional groups such as carboxyl group, NHS ester or isocyanate, so it is convenient for chemical covalent coupling.

iFluor 488 amine is widely used in the labeling of antibodies, proteins, nucleic acids, microspheres and nanomaterials, as well as in the construction of specific fluorescent probes, FRET systems or enzyme substrates.

Its high brightness and low background fluorescence are suitable for flow cytometry, immunofluorescence, microscopic imaging and quantitative analysis experiments, and are a universal green dye choice for biomedical research and diagnostic development.

iFluor 488 amine 是一种绿色荧光染料，激发/发射波长约为493/519 nm，其发射性质与 Alexa Fluor 488 或 FITC 相似，但在光稳定性和亮度方面具优势。

染料分子末端含有伯胺基团，可用于与含羧基、NHS 酯或异氰酸酯等亲电官能团反应，方便进行化学共价偶联。

iFluor 488 amine 广泛应用于抗体、蛋白质、核酸、微球及纳米材料的标记中，也适用于构建特异性荧光探针、FRET 体系或酶底物。

其高亮度和较低背景荧光非常适合用于流式细胞术、免疫荧光、显微成像和定量分析实验，是生物医学研究和诊断开发中的通用型绿色染料选择。

【标记步骤】

（一）染料准备

将 iFluor 488 NHS Ester 粉末溶解于无水 DMSO（二甲基亚砜）中，配制成高浓度储存液（如 1-10 mM），避光保存。

使用前用缓冲液（如 PBS 或 HBSS）稀释至工作浓度（通常 1-10 μM），避免长时间暴露于光或高温环境。

（二）细胞处理

对活细胞进行洗涤（用无血清培养基或缓冲液去除游离氨基干扰物）。

加入染料工作液，在 37°C 避光孵育 15-30 分钟（具体时间需优化），避免过度标记导致毒性。

（三）终止反应与清洗

移除染料溶液，用预冷的缓冲液洗涤细胞 2-3 次，终止反应并去除未结合染料。

必要时可加入含血清的培养基淬灭残留活性染料。

（四）检测与分析

通过荧光显微镜（激发/发射波长约 491/516 nm）或流式细胞术观察标记效果。

若标记细胞内目标（如胞质蛋白），需先使用温和透化剂（如 0.1% Triton X-100）处理细胞，但需注意可能影响细胞活性。

关键特性与优势

高亮度与光稳定性：iFluor 488 的荧光强度优于传统 FITC，且对 pH 变化（pH 4-10）不敏感，适合长时间活细胞成像。

低毒性：在优化浓度下对细胞活性影响较小，适用于活细胞动态追踪。

广泛应用：可用于标记抗体、细胞表面蛋白（如受体）、胞内抗原，或与凝集素（如 WGA）联用标记细胞膜。

【相关试剂】

ATTO 655 TCO

ATTO 488 TCO

ATTO 680 TCO

ATTO 700 TCO

Annexin V-iFluor 633标记

Annexin V-iFluor 350标记

AF350-羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

AF488-羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

AF594-标记羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

AF488酸 相当于Alexa Fluor 488酸

AF488 酪胺(XFD488 tyramide reagent)

AF546 酪胺(XFD546 tyramide reagent)

AF594 酪胺(XFD594 tyramide reagent)

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司