AF 568 刀豆蛋白A的细胞表面标记与成像是怎样的？【干货分享！】

标题：AF 568 ConA

【参数信息】

英文名称：AF 568 ConA；Alexa Fluor 568 Concanavalin A

中文名称：Alexa Fluor 568 标记刀豆球蛋白A；AF 568 刀豆蛋白A

Ex/Em ：578/603 nm

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

刀豆蛋白A（ConA）是从刀豆（Canavalia ensiｆormis）中提取的一种凝集素（lectin），自20世纪中期以来被广泛用于糖生物学和免疫学研究。

其核心特性是特异性识别并结合糖类结构（如α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖残基），常用于细胞表面糖蛋白标记、免疫调节研究和糖复合物纯化。

随着荧光标记技术的发展，ConA被与多种荧光染料（如Alexa Fluor系列）偶联，以增强其在显微成像和流式细胞术中的应用。

AF568 ConA是其中一种常见变体，结合了AF568染料的高亮度、光稳定性和pH不敏感性（pH 4-10）。AF568 ConA是一种复合物。

其核心成分为：

刀豆蛋白A（ConA）：一种四聚体蛋白（分子量约104 kDa），依赖钙离子/锰离子激活，特异性结合α-D-甘露吡喃糖和α-D-葡萄吡喃糖残基。

Alexa Fluor 568染料：一种磺化水溶性橙色荧光染料，激发/发射波长约为578/603 nm，具有高量子产率、抗光漂白性和宽pH稳定性。

该复合物通过共价偶联（如NHS酯反应）形成，用于标记细胞表面的糖基化结构（如糖蛋白、糖脂），适用于活细胞或固定样本的荧光成像。

【AF 568 ConA的细胞表面标记与成像是怎样的？】

（一）标记原理与特性

特异性结合：ConA能够特异性识别并结合细胞表面的α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖残基（常见于糖蛋白和糖脂的末端结构），因此可标记细胞膜表面的糖基化修饰。

荧光特性：Alexa Fluor 568是一种橙红色荧光染料，激发波长为578 nm，发射波长为600 nm，具有高亮度、光稳定性和pH稳定性，适用于多色荧光成像。

（二）标记与成像流程

1. 样本准备

细胞培养：将细胞接种于盖玻片或培养板中，待生长至合适密度。

固定与透膜（可选）：

若需标记细胞内结构（如内质网），需先固定（如3.7%甲醛，10分钟）和透膜（0.1% Triton X-100，5分钟）。

若仅标记细胞表面，可跳过透膜步骤，直接使用活细胞或固定后非透膜样本。

2. 染色步骤

工作液配制：将AF 568 ConA溶解于缓冲液（如PBS或含1% BSA的缓冲液），典型工作浓度为50–200 μg/mL。

孵育：将工作液覆盖样本，室温避光孵育10–30分钟（活细胞）或延长至1小时（固定样本）。

清洗：用缓冲液（如PBS）洗涤2–3次，去除未结合探针。

3. 成像与检测

显微镜设置：使用荧光显微镜或共聚焦显微镜，选择Cy3/TRITC滤光片组（激发波长约568 nm，发射波长约600 nm）。

多色成像：AF 568 ConA的橙红色信号可与其他荧光探针（如DAPI、FITC）搭配，用于多通道成像。

应用场景：

细胞表面糖基化可视化（如膜受体分布）；

细胞凋亡研究（与Annexin V等联用）；

细胞绘画（Cell Painting）中内质网标记。

【相关试剂】

AF790 PEG4 DBCO

AF790 TCO

AF790四嗪

AF790 NHS酯

AF647-UTP

AF647-UTP

AF635酸

AF635 NHS 酯

AF635 马来酰亚胺

AF635胺

AF635 叠氮化物

AF635 炔烃

AF635 PEG4 DBCO

核酸染料 LDS 651

Amplite 荧光总核酸定量试剂盒

LAMP Green 50X DMSO 溶液

锌离子荧光探针Zinquin AM

BCECF, AM pH荧光探针BCECF, AM

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

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