Rhod-2三钾盐荧光钙探针加载失败或信号弱的原因有哪些？

标题：Rhod-2 Tripotassium Salt

【参数信息】

英文名称：Rhod-2 Tripotassium Salt

中文名称：荧光钙指示剂Rhod-2三钾盐

分子式：C40H39K3N4O11

分子量：869.06

细胞渗透性：膜不透水

激发/发射：556/576 nm

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

Calcium measurement is critical for numerous biological investigations. Fluorescent probes that show spectral responses upon binding Ca2+ have enabled researchers to investigate changes in intracellular free Ca2+ concentrations by using fluorescence microscopy, flow cytometry, fluorescence spectroscopy and fluorescence microplate readers.

The long-wavelength Rhod-2 Ca2+ indicators are valuable alternatives to Fluo-3 for experiments in cells and tissues that have high levels of autofluorescence.

钙测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针在结合 Ca2+ 时显示光谱响应，使研究人员能够使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离 Ca2+ 浓度的变化。

长波长 Rhod-2 Ca2+ 指示剂是 Fluo-3 的宝贵替代品，可用于在具有高水平自发荧光的细胞和组织中进行实验。

功能与工作原理

钙离子特异性检测

作为 膜不通透性（Membrane-impermeant） 探针，无法自由穿透细胞膜，需通过以下方式加载：

微注射（Microinjection） ；

划痕标记（Scrape loading） ；

电生理灌注（仅适用于三钠盐）。

结合机制：

与游钙离子结合后，荧光强度随钙离子浓度升高而增强，实现实时动态监测。

线粒体靶向性

因具有脂溶性，进入细胞后可部分积累于线粒体，尤其在极化状态下靶向性更强，适合线粒体钙成像。

【探针加载失败或信号弱的原因与解决】

问题原因：

Rhod-2 Tripotassium Salt 是水溶性非细胞渗透性盐，无法被动进入细胞，需物理加载。

未添加辅助试剂（如Pluronic F-127），导致探针聚集。

细胞培养基含血清或酚红，干扰探针加载并增加背景荧光。

探针浓度不足（＜4 μM）或孵育时间过短（＜30分钟）。

解决方法：

物理加载技术：使用显微注射、贴片钳或刮片法强制导入细胞。

添加辅助试剂：工作液中加入 0.04% Pluronic F-127 防止探针聚集，并添加 0.5-1 mM丙磺舒（Probenecid）抑制有机阴离子转运体，减少探针外排。

优化培养条件：加载前去除培养基中的血清和酚红，用HHBS缓冲液洗涤细胞。

调整探针参数：终浓度设为 4-5 μM，37℃孵育 30-60分钟，孵育后洗涤去除残留探针。

【相关试剂】

钙离子荧光探针Fura8AM

钙离子荧光探针Fura8AM

钙离子荧光探针Rhod2三钾盐

钙离子荧光探针Rhod2三钠盐

钙离子荧光探针Rhod5N三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF三钾盐

钙离子荧光探针Quin2AM CAS 83104-85-2

钙离子荧光探针Quin2四钾盐 CAS 149022-19-5

钙离子荧光探针Fura Red,AM CAS 149732-62-7

磺酰罗丹明101,钠盐 荧光参照标准 CAS 465544-24-5

罗丹明 DHPE[Lissamine罗丹明B 1,2-二十六酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺,三乙铵盐]

以上资料由西安强化生物科技有限公司xxn整理！

本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司