「科研人必看！」K599农杆菌电转感受态细胞的核心结构和使用方法

&核心结构

菌株特性

K599属于发根农杆菌，携带pRi2659农杆碱型Ri质粒，该质粒赋予其链霉素抗性（strR）。

具有广泛的宿主范围，可感染多种单子叶和双子叶植物（如黄瓜、烟草、马铃薯等），适用于植物遗传转化。

经特殊工艺制备，适合大质粒转化（如基因组文库构建），质粒容量可达40 kb以上。

转化效率

使用pCAMBIA2301质粒检测时，转化效率 >10⁵ cfu/μg DNA；对40 kb大质粒（如pCAMBIA2301-ZH）效率约 5×10³ cfu/μg DNA。

质量控制确保无外源质粒污染，电转效率稳定。

抗性标记

天然抗性：strR，部分产品具CamR。

敏感性：对carb、rif敏感，对kan部分敏感。

试剂信息

英文名称：K599 Electrocompetent Cell

中文名称：K599农杆菌电转感受态细胞

规格：10ul,10x50ul

运输：低温运输

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

&使用方法

1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。

2) 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。

3) 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。

【注意：质粒DNA用试剂盒抽提，且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高，次使用做预试验确定最佳的质粒用量】。

4) 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电

击完成快速插入冰中。

5) 加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。

6) 6,000rpm离心1min，留取100ul左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。

室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

&相关试剂

Pan-caspase Inhibitor Z-VAD-FMK

Calcium lonophore A23187钙离子载体

lonomycin,Free Base离子霉素(游离酸)

EHA105 Electrocompetent cell农杆菌电转感受态细胞

LBA4404 Electrocompetent cell农杆菌电转感受态细胞

GV3101 Electrocompetent cell农杆菌电转感受态细胞

AGL1 Electrocompetent cell农杆菌电转感受态细胞

EHA101 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞

EHA105 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞

LBA4404 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞

AGL1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞

GV3101 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞

MSU440 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞

MSU440 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞

Lewis-Y (Ley) Tetrasaccharide 路易斯-Y四糖，82993-43-9

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！

原创作者：西安强化生物科技有限公司