pGBKT7-Lam Vector 酵母双杂交对照载体「知识科普」：酵母双杂交原理是怎样的？

试剂中英文名称：pGBKT7-Lam Vector 酵母双杂交对照载体

储存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋运输。

产地：陕西西安

载体类型：酵母双杂交系统载体

载体大小：7.9kb

纯度：≥95%

一、Product deｓcription：

pGBKT7-Lam是阴性对照质粒,能编码人Lamin C蛋白(a.a.66-230)和GAL4 DNA-BD(a.a.1-147)的融合蛋白。

其核心功能是验证实验中是否存在假阳性相互作用背景，确保实验结果的特异性。

pGBKT7-Lam is a negative control plasmid that encodes a fusion protein of human Lamin C protein (a.a.66-230) and GAL4 DNA-BD(a.a.1-147).

Its core function is to verify whether there is a false positive interaction background in the experiment and ensure the specificity of the experimental results.

载体定位：

作为标准化对照工具，可避免用户重复构建阴性对照载体，提升实验效率。

组成

它主要包含以下关键元件：

（1）GAL4 DNA 结合域（DNA-BD）

包含 GAL4 蛋白的 N 端 1-147 位氨基酸，负责结合酵母基因组中的上游激活序列（UAS），是酵母双杂交系统的核心结构域。

（2）Lamin C 蛋白片段

插入 Lamin C 的 66-230 位氨基酸片段，该蛋白定位在细胞核内，且极少与其他蛋白随机互作，因此适合作为阴性对照。

（3）c-Myc 表位标签

位于融合蛋白的 N 端，便于通过 Western blot 或免疫沉淀等技术检测蛋白表达。

（4）启动子与筛选标记

ADH1 启动子：驱动融合蛋白在酵母中组成型表达。

（5）T7 启动子：支持体外转录/翻译实验。

抗性标记：大肠杆菌中通过卡那霉素抗性（Kan）筛选，酵母中通过 TRP1 基因补偿色氨酸缺陷，实现营养选择。

（6）复制系统

在酵母中通过 2μori 实现高拷贝复制，在大肠杆菌中通过 pUCori 复制。

二、酵母双杂交原理是怎样的？

酵母双杂交系统的建立是基于对真核生物转录调控过程的认识。

真核生物中基因转录需要转录激活因子的参与，真核生物的转录激活因子含有两个不同的结构域：DNA结合结构域和DNA转录激活结构域，这两个结构域可以独立分开，功能互不影响。

BD和AD分别单独作用并不能激活转录反应，只有当二者在空间上充分接近时，才呈现完整的转录激活因子活性，使下游基因得到转录。

根据这一原理，可设计酵母双杂交系统。

POF将两待研究蛋白（蛋白X与蛋白Y）分别与BD、AD结构域构建融合质粒。

将构建好的两个质粒转入同一酵母细胞中表达，如果两蛋白之间不存在相互作用，则下游基因（报告基因）不会转录表达；如果两个蛋白存在相互作用,则BD与AD两结构域空间上很接近，从而下游基因（报告基因）得到转录。

判断通过报告基因表达与否,即可判断两蛋白之间是否存在相互作用。

以上由西安强化生物小编xxn整理

用于科研相关领域，不能用于人体实验！

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