OrigamiB(DE3）Chemically Competent Cell化学感受态细胞的诱导步骤【超详细】

【Sample Induction Protocol (for reference only)】

（1）Inoculate a single colony from a freshly streaked plate into 5 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic for the plasmid and host strain.

（2）Incubate with shaking at 200 rpm at 37℃ overnight.

（3）Inoculate 50 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic with 0.5 ml of the overnight culture prepared in step 2(use the 500 ml triangular flask as the container would be better).

（4）Incubate with shaking at 150 rpm at 37℃ until the OD 600 reaches 0.5-0.8.

（5）(Optional)Pipet 1ml of the cultures into clean microcentrifuge tubes and place the tubes on ice until needed for gel analysis or storage at -20℃. These will serve as the non-induced control samples.

（6）Add IPTG to a final concentration of 1 mM. Optimal time for induction of the target protein may vary from 2-16 hours, depending on the protein.

（7）Incubate with shaking at 120 rpm at 37℃ for 3-4 hours. To determine the optimal time for induction of the target protein, it is recommended that a time course experiment be perｆormed varying the induction from 2-16 hours.

（8）Place the culture on ice for 10 minutes. Harvest cells by centrifugation at 5,000×g for 10 minutes at 4℃.

（9）Remove the supernatant and store the cell pellet at -20℃ (storage at lower temperatures is also acceptable).

样品诱导方案（仅供参考）

（1）将新鲜划线平板上的单个菌落接种至含有质粒和宿主菌株相应抗生素的5 ml LB培养基中。

（2）在37℃下以200 rpm的转速振荡培养过夜。

（3）接种50 ml含适当抗生素的LB培养基，其中含有步骤2制备的过夜培养物0.5 ml（使用500 ml三角瓶作为容器会更好）。

（4）以150 rpm的转速在37℃下振荡培养，直到OD 600达到0.5-0.8。

（5）可选）用移液管吸取1毫升培养液至洁净微量离心管，置于冰上保存待测凝胶分析或-20℃冷冻保存。这些样本将作为非诱导对照组。

（6）加入IPTG至终浓度为1 mM。目标蛋白的诱导时间最佳值可能在2-16小时之间浮动，具体取决于目标蛋白种类。

（7）在37℃下以120 rpm的转速振荡孵育3-4小时。为了确定目标蛋白诱导的最佳时间，建议进行时间过程实验，将诱导时间从2-16小时进行变化。

（8）将培养物置于冰上10分钟。在4℃下以5,000×g离心10分钟收集细胞。

（9）移除上清液，将细胞沉淀物储存在-20℃（也可以在较低温度下储存）。

【试剂名称】

英文名称：OrigamiB(DE3） Chemically Competent Cell

中文名称：OrigamiB(DE3）大肠杆菌化学感受态细胞

【物理性质】

产地：陕西西安

规格：10×100μl，50×100μl

【运输与保存】

纯度：≥95%

运输：低温运输。

保存：-20℃，干燥、避光。

【注意事项】

个人防护：佩戴合适的防护眼镜、手套、防护服等。

实验条件：温度、湿度要求，远离火源、氧化剂等。

【相关的试剂】

6-TET叠氮化物

5-dTMR,琥珀酰亚胺酯

CDCF 活性氧ROS荧光探针

ReadiLink xtra iFluor 750

K599 Chemically Competent Cell

Ar A4 Chemically Competent Cell

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Ar 1193 Chemically Competent Cell

pCAMBIA1300 Plant Expression Vector

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pCAMBIA1305.1 Plant Expression Vector

Ar Qual Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

注意：本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！

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