pETBlue-2 Vector 大肠杆菌表达载体的技术原理是什么？有哪些应用前景？

试剂中英文名称：pETBlue-2 Vector 大肠杆菌表达载体

储存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋运输。

产地：陕西西安

载体用途： 大肠杆菌表达载体

载体大小： 3653bp

载体标签： C-HSV，C-6×His

原核抗性： Amp

克隆菌株： DH5α

真核抗性：LacZ

启动子： T7

复制子： pBR322

纯度：95%

一、背景描述：

The pETBlue vectors are designed to identify recombinants by traditional blue/white screen-ing while also allowing T7lac promoter based expression of target genes.

Screening is independent of expression because the T7lac expression promoter is in an opposed orientation relative to the E.coli promoter that mediates blue/white screening.

pETBlue-2 defines the open reading ｆframe and in-serts must be cloned in-ｆframe if expression is desired.

The vector features an expanded multiplecloning site (MCS) and optional C-terminal HSV•Tag and His•Tag sequences.

The cloning/expres-sion region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below.

The sequence is numbered from the first base of the T7 promoter sequence.

Unique sites are shown on the circlemap.

The f1origin in pETBlue-2 is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single stranded DNA that corresponds to the coding strand.

Therefore, single stranded sequencing should be perｆormed using the pETBlueDOWN prime.

技术原理

（1）双功能分离设计

目标基因以反义方向插入lacZα肽编码区，实现蓝白筛选；而T7转录/翻译信号位于基因上游，确保表达时以正义方向工作。

（2）严格调控表达

T7启动子不被大肠杆菌RNA聚合酶识别，仅由T7 RNA聚合酶（由DE3溶源噬菌体提供）特异性激活，实现本底泄漏低、诱导后高表达。

（3）高翻译效率

利用T7基因10的翻译起始信号（RBS），提升目标蛋白产量。

二、应用前景

（1）基础研究

重组蛋白表达：广泛用于克隆、表达与纯化外源蛋白，尤其适合需要可溶性表达的课题。

蛋白互作研究：融合标签支持Pull-down、Co-IP等互作实验。

（2）工业与疫苗开发

载体设计理念（如高效启动子、标签系统）已被用于疫苗抗原表达平台，展示其在生物制剂生产的潜力。

（3）高通量筛选优化

蓝白筛系统适用于大规模重组库筛选，为突变体文库构建提供便利。

使用优势

（一）高效克隆与筛选

蓝白筛选手动直观，大幅减少假阳性；高拷贝数pUC复制起点（>500拷贝/细胞）提升质粒产量。

（二）灵活的表达控制

IPTG诱导浓度可调，适用于毒性蛋白或优化表达条件。

（三）便捷的蛋白纯化与检测

双标签（6×His/HSV•Tag）支持多种纯化策略（如镍柱、抗体亲和层析）和检测方法。

（四）系统兼容性

与pET系统宿主（如BL21系列）高度匹配，Lon/OmpT蛋白酶缺陷型菌株减少蛋白降解。

（五）商业化稳定性

质粒以冻干粉形式提供，4℃避光保存，稳定性好；配套详细操作流程（溶解、转化、保存）。

以上由西安强化生物小编xxn整理

用于科研相关领域，不能用于人体实验！

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