酵母菌化学感受态细胞，BY4741 Chemically Competent Cell的应用前景如何？操作步骤有哪些？

试剂中英文名称：BY4741 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

储存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋运输。

产地：陕西西安

温度敏感性：菌株对高温敏感

合适生长温度：27–30℃

纯度：95%

一、背景描述：

Product Deｓcription

BY4741 strain is derived from the original strain of Saccharomyces cerevisiae, S288C, which is a commonly usedstrain in the laboratory and is a gamete MATa type, which is widely used Sodium and potassium ion balance; Cells resist salts: absorption of various ｍmbedl ions: heavy ｍmbedl toxicity: Various sugars, carbon sources for eukaryotic cell growth influence: Peroxide, superoxide absorption and transport in the study.

BY4741 Saccharomyces cerevisiae is a compound of histidine, leucine, methionine,Uracil-deficient strain that transｆorms pYES2 plasmids directly into BY4741 cells via PEG/LiAc.

Screening of plasmid pYES2 The flag is URA, which can be filtered using the SD-URA tablet.

BY4741 comDetent cells are speciallv pYES2 plasmid detection conversion efficiency > 10 cfu/Ug DNA.

BY4741 菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C，是实验室的常用菌株，为配子MATa 型，广泛应用于钠，钾离子平衡；细胞抗盐；各种金属离子的吸收；重金属毒性；各种糖类，碳源对真核生物细胞生长的影响；过氧化物，超氧化物的吸收与运输的研究中。

BY4741酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通过 PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BY4741细胞内。

质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA平板进行筛选。

BY4741感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存六个月，pYES2 质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

应用前景

（1）基因功能研究平台

通过基因敲除（如YCF1基因突变株△ycf1）研究重金属解毒机制。

用于启动子活性分析、信号通路验证等分子生物学实验。

（2）蛋白表达与互作分析

适用于酵母单杂交（Y1H）、双杂交（Y2H）系统，检测蛋白-DNA或蛋白-蛋白相互作用。

可表达非毒性重组蛋白。

（3）工业与医药研发

研究酵母在胁迫环境（高盐、重金属）下的适应性，为工业菌株改良提供依据。

探索糖代谢机制，助力生物燃料或食品工业开发。

二、技术操作流程

核心步骤（综合）：

（1）预处理：

冰上融化感受态细胞（100μl），避免反复冻融。

载体DNA（Carrier DNA）需96℃变性3分钟，冰浴骤冷，重复一次以消除二级结构。

（2）转化混合：

依次加入：1–3 μg目标质粒、10 μl变性载体DNA、500 μl PEG/LiAc溶液，轻柔混匀。

（3）温育反应：

30℃水浴30分钟（每15分钟翻转混匀）→ 42℃水浴15分钟（每7.5分钟翻转）。

（4）离心与涂板：

5000 rpm离心40秒，弃上清，用ddH₂O重悬洗涤一次。

终重悬于50 μl ddH₂O，涂布于SD-URA平板，29℃培养48–96小时。

（5）关键注意事项：

温度敏感：酵母在＞30℃时生长受抑制，操作需严格控制温度。

培养基差异：不同营养缺陷型培养基（如SD-LEU vs. SD-URA）中菌落生长速度可能不同，需调整培养时间。

质粒浓度：高纯度质粒可提升转化效率，避免使用毒性基因。

以上由西安强化生物小编xxn整理

用于科研相关领域，不能用于人体实验！

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