小白也能上手！Tunicamycin的实验步骤和注意事项「超详细！」11089-65-9

一、物理参数与实验步骤：

储存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋运输。

产地：陕西西安

试剂中英文名称：Tunicamycin from Streptomyces lysosuperficus 衣霉素，来源于链霉菌属

CAS NO：11089-65-9

分子式：C37H60N4O16

分子量：816.89

状态：白色粉末

溶解性：溶于DMSO(20 mg/mL)、DMF(20 mg/mL)

纯度：95%

背景描述：

衣霉素（Tunicamycin），分离自Streptomyceslysosuperficus，是衣霉素A，B，C和D的混合物。

一种核苷酸类抗生素，体外可抵抗革兰氏阳性菌、酵母、真菌和病毒的生长和繁殖；还可抑制多种生化功能，比如糖蛋白、胶原前胶原蛋白和肽聚糖合成，

血浆细胞内的IgA和IgE分泌活动等。

衣霉素通过抑制N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸转运到多萜醇单磷酸的步骤来阻断蛋白N-糖苷键的形成。

衣霉素还可抑制细菌和真核细胞N-乙酰氨基葡萄糖胺转运酶，以及防止N-乙酰氨基葡萄糖胺脂质中间体的产生。

在人T-淋巴样干细胞中可抑制功能性凝血酶受体的表达、凝血酶诱导的Ca2+动员等。

二、实验步骤：

1. 溶液配制

母液制备：

用DMSO或DMF溶解衣霉素粉末，推荐浓度：

DMSO母液：33.33 mg/mL（需超声助溶）。

DMF母液：>10 mg/mL。

也可用热甲醇（4.9–5.1 mg/mL）或碱性水溶液（pH≥12，10 mg/mL）。

注意：

避免使用酸性溶剂（衣霉素在酸性条件下不稳定）。

水溶液需用缓冲液（如PBS）稀释，并在中性/碱性条件下使用。

2. 体外实验（细胞培养）

典型剂量：

2 μg/mL（处理24小时），可诱导内质网应激（如增加XBP-1剪切、CHOP表达）。

剂量范围：0.1–10 μg/mL，需根据细胞类型优化（高剂量易致细胞死亡）。

操作流程：

将母液用培养基稀释至目标浓度。

加入细胞培养体系，孵育指定时间（通常6–48小时）。

检测指标：糖基化水平、细胞周期、凋亡、ER应激标记物等。

3. 体内实验（动物模型）

药物配制：

用DMSO溶解后，进一步稀释于生理溶剂：

配方1：10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45%生理盐水。

配方2：10% DMSO + 90%玉米油。

终浓度≥2 mg/mL（澄清溶液）。

给药方案（示例）：

小鼠前房注射：

剂量：0.03–3 μg/眼（溶于DMSO，体积2 μL）。

麻醉：（73 mg/kg）和甲苯噻嗪（1.8 mg/kg）混合麻醉。

肿瘤模型：

剂量参考：文献中通过腹腔或静脉注射，具体需根据模型优化。

4. 保存与安全

储存条件：

粉末：-20℃避光干燥保存（稳定性≥3年），或2–8℃避光（部分产品）。

溶液：-80℃可存6个月，-20℃存1个月。

安全警示：

衣霉素为剧毒物质（急性口服毒性1类），操作需穿戴防护装备，在通风橱中进行。

避免高剂量使用（诱导细胞凋亡）。

实验操作注意事项：

毒性风险：

剧毒物质（急性口服毒性1类），对肝、肾有毒性，可抑制酶活性。

操作时必须穿戴实验服、手套及护目镜，在通风橱中进行。

避免接触皮肤或吸入粉尘，废弃物需按危险化学品规范处理。

细胞实验关键点：

剂量依赖性效应：低剂量抑制糖基化，高剂量诱导细胞凋亡或死亡。

典型应用浓度：0.1–10 μg/mL（需预实验优化）。

西安强化生物同类型试剂整理如下：

Prostaglandin A3 (PGA3) 前列腺素A3

Prostaglandin E3 (PGE3) 前列腺素E3

Carboxy-PTIO一氧化氮（NO）清除剂

Prostaglandin E3 (PGE3)CAS：802-31-3

EGTA AM,CalciumChelator钙螯合剂，99590-86-0

SYBR14 Nucleic Acid Stain(5mM)绿色荧光核酸染料

DAF-FM DA (5mM in DMSO)一氧化氮（NO）荧光探针

Sodium Nitroprusside (SNP) Dihydrate硝普钠二水合物

免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞

BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

JM109(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

HT115(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

setta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大肠杆菌感受态细胞l

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