Frozen-CC Yeast Transｆormation Kit for Pichia pastoris酵母转化试剂盒（用于毕赤酵母）的作用机制

【作用机制】

感受态细胞制备：

通过活化菌种、液体培养至对数生长期（OD600=0.6-1.0），离心收集菌体。

用制备液反复洗涤和重悬菌体，使细胞处于待转化状态（即"感受态"）。

关键步骤：初次使用Carrier DNA时需煮沸5分钟并冰浴，使其变性为单链DN段，以增强其与质粒DNA的结合能力，保护质粒并辅助进入细胞。

转化过程：

将质粒DNA与预变性的Carrier DNA加入未融化的感受态细胞中，30℃水浴融化并混匀。

加入转化液，30℃孵育60分钟，促进质粒DNA通过细胞膜进入酵母细胞：

Carrier DNA作用：形成"载体-质粒复合物"，中和细胞表面负电荷，减少质粒降解，并通过同源重组机制辅助线性化质粒整合到酵母基因组特定位点。

转化液成分：含聚乙二醇（PEG）和醋酸锂（LiAc），破坏细胞壁通透性，增强DNA摄入效率。

离心弃上清，用重悬液悬浮菌体后涂布于筛选平板，30℃培养3-5天获得转化子。

效率保障机制：

同源重组整合：线性化质粒可通过毕赤酵母的同源重组系统稳定整合到基因组中，实现长期表达。

冻存稳定性：感受态细胞经程序性降温后冻存，转化效率可保持6个月。

适用范围：适用于毕赤酵母常见菌株，转化效率受菌株类型和质粒整合效率影响。

【试剂名称】

英文名称：Frozen-CC Yeast Transｆormation Kit for Pichia pastoris

中文名称：酵母转化试剂盒（用于毕赤酵母）

【物理性质】

组分：液态制备液、转化液、重悬液 + 冻干载体DNA。

保存：载体DNA -20℃；其他组分 4℃；感受态细胞 -80℃冻存。

形态：无色透明溶液。

【运输与保存】

纯度：≥95%

运输：低温运输。

保存：-20℃，干燥、避光。

【注意事项】

个人防护：佩戴合适的防护眼镜、手套、防护服等。

实验条件：温度、湿度要求，远离火源、氧化剂等。

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注意：本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！

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