871487-69-3，5(6)-FITC DA基于类似荧光酯酶底物操作的实验步骤

标题：5(6)-FITC DA，荧光酯酶底物，CAS：871487-69-3

【参数信息】

英文名称：5(6)-FITC DA

中文名称：5(6)-FITC DA，荧光酯酶底物

CAS NO：871487-69-3

分子式：C26H19NO7S

分子量：489.49656

状态：白色固体

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

5(6)-FITC DA 是一种细胞可渗透的荧光酯酶底物，通过胞内酯酶水解激活荧光，用于检测细胞活力和酶活性。

其核心机制是乙酰基水解生成带负电荷的羧基荧光素，实现荧光信号滞留与定量分析。

功能机制

（1）作为荧光酯酶底物

细胞渗透性：

5(6)-FITC DA 可穿透细胞膜，被细胞内 酯酶（esterases）水解，脱去乙酰基生成荧光产物 5(6)-FITC。

荧光激活：

水解前：无荧光或弱荧光。

水解后：释放强绿色荧光（激发/发射峰值约 492–504 nm / 518–529 nm）。

双重检测功能：

酶活性标志：荧光强度反映细胞内酯酶活性。

细胞膜完整性标志：荧光产物需完整细胞膜才能滞留于细胞内；若膜破损，荧光会泄漏。

（2）作为蛋白标记前体

水解生成的 5(6)-FITC 是 氨基反应性荧光标签，其异硫氰酸酯基（-N=C=S）可与蛋白质的氨基（如赖氨酸侧链）共价结合，形成稳定荧光标记。

【实验步骤（基于类似荧光酯酶底物操作）】

（一）工作液配制

储存液配制：

用适当溶剂（如DMSO或无水乙醇）溶解粉末，配制成10–50 mM储存液。

工作液稀释：

使用前用无血清培养基或缓冲液（如PBS）稀释储存液至终浓度1–10 μM（根据细胞类型优化）。

注意：避免含胺缓冲液（如RPMI），防止干扰反应。

（二）细胞标记与孵育

步骤：

去除细胞培养液，用预热的PBS清洗细胞1–2次。

加入工作液覆盖细胞，37°C避光孵育15–30分钟。

离心（400 g, 3–4分钟），弃上清（贴壁细胞可直接吸除）。

用PBS清洗细胞2次，去除未进入细胞的染料。

（三）检测方法

荧光显微镜：

使用FITC滤光片观察绿色荧光。

流式细胞术：

用PBS或无血清培养基重悬细胞，在FL1/BL1通道检测荧光。

酶标仪：

设置激发波长490–497 nm，发射波长515–520 nm，定量荧光强度。

（四）可选步骤（固定与透化）

若需后续抗体标记：

用3.7%多聚甲醛室温固定15分钟。

冰丙酮透化10分钟。

PBS清洗后继续实验。

【相关试剂】

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

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