90217-02-0，5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride (CTC) 氧化还原染料的详细实验步骤！

标题：5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride (CTC) 氧化还原染料

【🍬参数信息】

英文名称：5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride (CTC)

中文名称：5-氰基-2，3-二-（P-苄基-四唑氯化物）

CAS NO：90217-02-0

分子式：C16H14ClN5

分子量：311.77 g/mol

外观：白色或浅橙色结晶性粉末

溶解性：溶于水

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

【简单概述】

5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride (CTC) ，是一种灵敏的氧化还原染料，主要用来检测微生物的代谢活性。

这一膜渗透性的染料能迅速被健康的活细胞摄取，通过呼吸活动中的电子传递被还原成一种不溶于水、发红色荧光的甲臜结晶—CTC甲臜。

而不呼吸或呼吸能力很弱的细胞不能或仅还原少的CTC，不产生或产生弱的荧光产物，因此，提供一种半定量的方法来评估健康&不健康细胞。

CTC本身溶于水且在水溶液中无荧光。

CTC甲臜虽在低粘度的液体中无荧光，但在高粘度的液体和固体状态下发红色荧光。

因此，通过荧光显微镜计数或流式细胞术分析，能够研究具呼吸活性的细胞。

CTC甲臜的激发波长为430nm或480nm，发射波长为630nm。

【实验步骤（综合多个应用场景）】

通用流程（微生物代谢活性检测）

（一）溶液配制：

常用浓度：2.5–5 mM，或 1% (v/v) 水溶液。

母液制备：如，将5 mg CTC溶于0.33 ml蒸馏水（约15 mg/ml），分装冷冻保存。

（二）样品处理：

浮游微生物（水样）：

取2 ml样品，加入200 μl 50 mM CTC溶液（终浓度约4.5 mM），室温避光孵育 1–4小时。

或过滤至0.2 μm黑色聚碳酸酯膜，加入含CTC的R2A培养基（1:2稀释），孵育后冲洗。

生物膜/组织样品：

如鳃组织：100 μl PBS中加入1 μl CTC母液，4℃避光孵育 2–4小时，PBS冲洗3–5次。

生物膜载玻片：用4 mM CTC矿物盐培养基孵育1小时，DAPI复染。

（三）孵育条件：

时间：0.5–5小时，常用1小时。

温度：室温

或37℃，部分需避光振荡。

注意事项：

避免高浓度磷酸盐（抑制还原反应）。

低代谢样品需延长孵育时间。

四（s）检测与观察：

显微镜观察：

激发光： 蓝光滤片（400–480 nm），或480 nm激光（流式细胞术）。

发射光：>590 nm红光，使用罗丹明滤片或590 nm屏障滤片。

结果判读：

活细胞/高代谢细胞：还原CTC为红色荧光甲臜结晶（CTF）。

死细胞/低代谢细胞：无荧光或弱荧光。

【相关试剂】

Cy3 生物素偶联物

MPP+ iodide

Tide Quencher 1胺

Tide Quencher 3胺

Hoechst 33258细胞核探针

Hoechst 33342细胞核探针

Propidium lodide碘化丙啶

DAPI(1mg/ml)DAPI染液(1mg/ml)

DAPI Stain,Ready-to-use即用型DAPI染液

Acridine Orange Hydrochloride吖啶橙盐酸盐

Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell

MPP+ iodide (N-Methyl-4-Phenylpyridinium Iodide)

Ar 1193 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

TOP10 Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

EPI400 Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

DH10B Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。

原创作者：西安强化生物科技有限公司